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Nec-1对铝致痴呆模型认知能力的影响及其作用机制

作　者: 李美琴
导　师: 牛侨
学　校: 山西医科大学
专　业: 劳动卫生与环境卫生学
关键词: Nec-1 铝学习记忆 RIP1 NF-κB LC3-Ⅱ Caspase-3
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的通过用凋亡阻断剂zVAD-fmk作为平行对照,来研究程序性坏死特异性阻断剂Nec-1对铝致痴呆模型小鼠的神经行为改变及其对细胞死亡方式的影响。方法取健康6月龄雄性昆明小鼠120只,分三批,第一批4个剂量组分别为：染铝对照组(0.5%ALCl3)、2Mm、4mM、8mM Nec-1组；第二批4个剂量组分别为：染铝对照组、75ng/2μl、150ng/2μl、300ng/2μl zVAD组；第三批4个剂量组分别为：染铝对照组、4mM Nec-1组、300ng/2μl zVAD组、Nec-1+zVAD组。连续5天每天1次侧脑室注射上述液体,其中铝溶液3μl/只/天、Nec-1和zVAD均为2μl/只/天。染毒期结束后第15天进行Morris水迷宫试验；染毒期结束后第20天处死小鼠,取脑,切取一半大脑浸泡在10%福尔马林中固定24h,做病理切片,进一步做HE染色、硫堇染色及RIP1的免疫组化；另一半大脑分离出海马做电镜,皮层置于EP管中,-70℃保存,用于Western-blot法检测NF-κB、LC3-II、Caspase3及RIP1的蛋白表达水平。结果①小鼠学习记忆能力测试：在Morris水迷宫实验中,不同浓度Nec-1作用于染铝模型小鼠后,与染铝溶剂对照组相比,在4天的定位航行实验中,4mM组和8mM组逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),在第5天的空间搜索实验中,2mM、4mM组和8mM组原平台象限停留时间显著延长(P<0.01)；不同浓度Z-VAD-FMK作用于染铝模型小鼠后,与染铝溶剂对照组相比,在4天的定位航行实验中,高剂量组逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),在第5天的空间搜索实验中,低、中、高剂量组原平台象限停留时间显著延长(P<0.01); Nec-1、zVAD联合作用于染铝模型小鼠后,与染铝溶剂对照组相比,在4天的定位航行实验中Nec-1组和Nec-1+zVAD组逃避潜伏期显著缩短(P<0.05),在第5天的空间搜索实验中Nec-1+zVAD组原平台象限停留时间显著延长(P<0.05)。②HE染色及硫堇染色病理组织学结果：不同浓度Nec-1、zVAD作用于染铝模型小鼠大脑皮质及海马CA3区病理改变显示：染铝溶剂对照组小鼠皮质区可见核周及胞浆空泡变性、个别细胞结构破坏以及细胞轮廓模糊,海马区细胞数量少,出现细胞连接松解,细胞核固缩等,部分细胞出现坏死表现,胞核聚集、浓缩、溶解等,在颗粒层中可见零星轻微损伤细胞,主要表现为细胞核被染为深蓝色、胞浆深红色,出现核周轻度空泡变性,随着Nec-1、zVAD剂量的升高,上述形态学改变逐渐减弱；Nec-1、zVAD联合作用于染铝模型小鼠大脑皮质及海马CA3区病理改变显示：Nec-1组和zVAD组上述形态学改变有所缓解,Nec-1+zVAD组少见细胞形态异常,且细胞数量明显增多,排列也较规则。③死亡相关蛋白的检测：Western blot法检测不同浓度Nec-1作用于染铝模型小鼠后其大脑皮质内caspase3的蛋白表达呈下降趋势,中、高剂量组caspase-3的蛋白表达较对照组显著降低,且差别有统计学意义(P<0.01)；LC3-Ⅱ的蛋白表达也呈下降趋势,且低、中、高剂量组较对照组显著降低,差别有统计学意义(P<0.01)；NF-κB的蛋白表达也基本呈下降趋势,但差别无统计学意义(P>0.05)；RIP的蛋白表达也基本呈下降趋势,且中剂量组较对照组显著降低,差别有统计学意义(P<0.05)。不同浓度zVAD.fmk作用于染铝模型小鼠,Western-blot法检测其大脑皮质内caspase3的蛋白表达呈下降趋势,高剂量组caspase3的蛋白表达较对照组显著降低,且差别有统计学意义(P<O.01),LC3-Ⅱ的蛋白表达呈增加趋势,且中、高剂量组较对照组显著增加,差别有统计学意义(P<0.01),NF-κB的蛋白表达呈下降趋势,且低、中、高剂量组较对照组显著降低,差别有统计学意义(P<0.01),RIP1的蛋白表达呈增加趋势,且中、高剂量组较对照组显著增加,差别有统计学意义(P<0.01)。Nec-1、zVAD联合作用于染铝模型小鼠,Western-blot法检测其大脑皮质内caspase3的蛋白表达呈下降趋势,且Nec-1组、zVAD组及Nec-1+zVAD组的caspase3的蛋白表达较对照组显著降低,且差别有统计学意义(P<0.01),LC3-Ⅱ的蛋白表达Nec-1组较溶剂对照组有降低趋势,zVAD组较对照组则增加趋势,Nec-1+zVAD组较对照有增加趋势,但均无统计学差异(P>0.05),但zVAD组较Nec-1组的升高有统计学差异(P<0.05),NF-κB的蛋白表达Nec-1、zVAD组较溶剂对照组有增加趋势,且差别有统计学意义(P<0.01), zVAD组较Nec-1组则呈降低趋势,且差别有统计学意义(P<0.01), Nec-1+zVAD组较对照有降低趋势,差别有统计学差异(P<0.05),RIP1的蛋白表达Nec-1组较溶剂对照组有降低趋势,且差别有统计学意义(P<0.01),zVAD组较对照组则增加趋势,且差别有统计学意义(P<0.01), Nec-1+zVAD组较对照有降低趋势,但无统计学差异(P>0.05)。结论Nec-1、zVAD均可改善铝所致的小鼠学习记忆能力降低,且Nec-1较zVAD对改善模型小鼠的学习记忆功能作用更明显。Nec-1、zVAD对铝染毒脑组织光镜下出现的显著病理变化有改善作用,并且随着剂量的升高损伤修复作用越明显,Nec-1、zVAD联合作用于模型小鼠较单独作用有显著改善作用。Nec-1对铝致小鼠学习记忆损伤修复的病理机制可能与抑制RIP1蛋白的表达从而减少相关神经元的丢失有关。

全文目录

英文缩略词表  5-6
摘要  6-8
Abstract  8-11
前言  11-15
第一节 Nec-1对铝致痴呆模型认知能力的影响  15-22
  1.材料与方法  15-17
  2.结果  17-19
  3.讨论  19-21
  参考文献  21-22
第二节不同处理组小鼠大脑皮质及海马CA3区病理形态学改变  22-34
  1.材料与方法  22-23
  2.结果  23-30
  3.讨论  30-33
  参考文献  33-34
第三节各死亡相关蛋白在不同处理组的表达  34-45
  1 材料与方法  34-37
  2 结果  37-41
  3 讨论  41-44
  参考文献  44-45
总结  45-46
综述  46-53
个人简历  53-54
致谢  54

Nec-1对铝致痴呆模型认知能力的影响及其作用机制

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