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鱼头多糖的分离提取、纯化及功能鉴定

作　者: 刘晓宁
导　师: 刘安军
学　校: 天津科技大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 鱼头多糖 SDS-PAGE K562细胞 BEL7402细胞 体外抗氧化 MTT法 细胞周期
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 125次
引　用: 1次
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内容摘要


在鱼等水产品加工过程中产生的下脚料约占原料鱼的40%-45%。开展水产品加工下脚料和废弃物的综合利用,可变废为宝,生产出各种农业、轻工、医药、环保和食品行业所需的新产品,大大提高水产品的附加值,降低主导产品的成本,取得较高的经济、生态和社会效益。因此,鱼加工废弃物的开发利用越来越受到重视。本课题以淡水鱼鱼头为原料,研究了鱼头多糖的不同提取方法和最佳提取条件,进行了鱼头多糖的体外抗氧化实验的研究,还进行了一系列细胞培养的实验来进一步研究其功能。采用单因素实验,均匀设计和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验确定了鱼头多糖的最佳提取方法以及最优提取条件,即提取温度30℃,乙醇浓度75%,料液比1:5.5,提取时间13h和提取液浓度1mol/L。通过体外抗氧化实验证明:鱼头多糖对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基都有一定的清除作用,且能达到较高的清除率。鱼头多糖对超氧阴离子自由基和羟自由基的半数清除浓度分别为0.41mg/mL和1.98 mg/mL。MTT实验表明,鱼头多糖对白血病细胞K562和肝癌细胞BEL7402都有抑制作用。通过对K562细胞和BEL7402细胞的形态观察可知,鱼头多糖对K562细胞和BEL7402细胞的确有杀伤作用,但是细胞的死亡方式不是凋亡。鱼头多糖作用于K562细胞后,随着多糖作用时间的增加,S期比例增加,G0/G1和G2/M比例减少;鱼头多糖作用的BEL7402细胞则无明显周期变化,仅仅出现凋亡细胞数增多的现象。在多糖作用72h后,凋亡细胞的比例分别为K562细胞21.28%,BEL7402细胞11.80%。这表明,鱼头多糖对BEL7402细胞周期分布无显著影响,且凋亡现象不明显,并伴有明显的坏死现象。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
1.前言  9-23
  1.1 水产资源综述  9-11
    1.1.1 我国水产资源简介  9
    1.1.2 我国水产加工概括  9-10
    1.1.3 鱼头简介  10-11
  1.2 多糖  11-14
    1.2.1 多糖的生理活性  11-12
    1.2.2 多糖抗癌的研究进展  12-13
    1.2.3 活性多糖在食品中的应用  13-14
  1.3 体外抗氧化概述  14-21
    1.3.1 抗氧化与自由基  15-18
    1.3.2 协助体内抗氧化的物质  18
    1.3.3 抗氧化的方法  18-21
  1.4 本课题的研究内容及意义  21-23
2.材料与方法  23-37
  2.1 材料  23-25
    2.1.1 实验仪器  23
    2.1.2 试剂  23-25
    2.1.3 实验细胞  25
    2.1.4 实验原料  25
  2.2 实验方法  25-37
    2.2.1 鱼头比例的测定  25
    2.2.2 鱼头常规成分的检验  25-26
    2.2.3 鱼头多糖的乙醇-氢氧化钠提取方法  26
    2.2.4 鱼头多糖的水提取方法  26-27
    2.2.5 鱼头多糖的生理盐水提取方法  27
    2.2.6 鱼头多糖的弱碱提取方法Ⅰ  27
    2.2.7 鱼头多糖的弱碱提取方法Ⅱ  27
    2.2.8 单因素实验确定各种提取方法最佳提取条件  27-28
    2.2.9 鱼头的多糖含量的测定  28
    2.2.10 鱼头粗多糖的蛋白质含量的测定  28-30
    2.2.11 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)  30-32
    2.2.12 鱼头多糖的纯化方法  32-33
    2.2.13 鱼头多糖体外抗氧化能力的测定  33-34
    2.2.14 鱼头多糖的红外光谱分析  34
    2.2.15 细胞系及细胞培养  34-35
    2.2.16 MTT法检测鱼头多糖的胞毒作用  35
    2.2.17 HE染色  35-36
    2.2.18 细胞周期分布的测定  36-37
3.结果与讨论  37-65
  3.1 鱼头等各部分占鱼体比例测定结果  37
  3.2 鱼头常规成分的检验结果  37
    3.2.1 杂质测定结果  37
    3.2.2 鱼头的水分含量测定结果  37
    3.2.3 鱼头的脂肪含量测定结果  37
  3.3 乙醇-氢氧化钠提取方法的最佳提取条件  37-39
  3.4 水、生理盐水及弱碱提取方法Ⅰ的最佳提取条件  39-40
  3.5 弱碱提取方法Ⅱ的最佳提取条件  40-45
  3.6 多糖含量的测定结果  45-46
    3.6.1 多糖标准曲线的绘制  45
    3.6.2 多糖含量的测定结果  45-46
  3.7 蛋白含量的测定结果  46-47
    3.7.1 Folin-酚法测定蛋白质含量标准曲线的绘制  46
    3.7.2 Folin-酚法测定蛋白质含量的测定结果  46
    3.7.3 微量凯氏定氮法(Micro-Kjeldahl)总氮含量测定结果  46-47
  3.8 SDS-PAGE所得结果  47-48
  3.9 鱼头多糖最佳提取方法的确定  48-49
    3.9.1 各种提取方法的优缺点  48
    3.9.2 最佳提取方法的确定  48-49
  3.10 DEAE Sephadex A-25(DEAE葡聚糖凝胶A-25)柱纯化结果  49-50
  3.11 鱼头多糖红外光谱实验结果  50-52
  3.12 鱼头多糖体外抗氧化实验结果  52-58
    3.12.1 鱼头多糖清除DPPH·(1,2-二苯代苦味肼基自由基)实验结果  52-55
    3.12.2 鱼头多糖清除超氧阴离子(O~(2-)·)作用结果  55-56
    3.12.3 鱼头多糖清除羟自由基(·OH)能力的测定结果  56-58
    3.12.4 抗氧化实验结论  58
  3.13 鱼头多糖对肿瘤细胞的增殖抑制作用  58-60
  3.14 HE染色观察细胞形态变化  60-61
  3.15 鱼头多糖对细胞周期分布影响的结果  61-65
4.结论  65-67
5.展望  67-68
6.参考文献  68-73
7.攻读硕士学位期间论文发表情况  73-74
8.致谢  74

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 化学分析与鉴定
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