学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

有机磷农药多残留免疫分析方法的研究

作　者: 尹丽梅
导　师: 胥传来
学　校: 江南大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 有机磷农药对硫磷甲基对氧磷多残留分析 ELISA
分类号: R155.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 173次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本论文旨在研究有机磷农药的多残留酶联免疫(ELISA)分析方法。试验首先以对羟基苯丙酸和二甲氧基磷酰氯为原料,通过甲酯化、酰化、水解三个步骤合成了甲基对氧磷的半抗原O,O-二甲基-O-(4-丙酸基苯基)磷酸酯。将甲基对氧磷半抗原和对硫磷半抗原(氨基对硫磷)分别与不同的载体蛋白(BSA,OVA)偶联,制备了对应的免疫原和包被原。每种免疫原分别免疫两只新西兰大白兔获得多克隆抗体。通过方阵滴定法确定工作浓度及血清效价,并选择较优的血清供后面试验用。以对硫磷为例建立了间接竞争性ELISA分析方法,并对ELISA分析的影响因素如有机溶剂的种类及含量、离子强度、pH进行了优化。在最优条件下,建立了对硫磷和甲基对氧磷的标准抑制曲线和回归方程。其中对硫磷的IC50为0.343μg/mL,LOD (IC10)为0.005μg/mL,线性范围(IC20～IC80)为0.014～8.24μg/mL;甲基对氧磷的IC50为0.368μg/mL,LOD (IC10)为0.004μg/mL,线性范围(IC20～IC80)为0.015～12.02μg/mL。以包菜为样本,同时添加了对硫磷和甲基对氧磷,在不同的孔中同时测得两种农药的回收率分别为79.00%～88.40%和74.00%～81.40%,变异系数分别为3.48%～8.53%和3.53%～7.89%。该分析方法重复性良好,相对标准偏差低于10%,可以满足对硫磷和甲基对氧磷同时检测的要求。另外,还针对常用的二乙氧基有机磷农药进行了多残留酶联免疫分析方法的研究。首先对几种常用的二乙氧基磷酸酯农药毒死蜱、二嗪农、对硫磷、对氧磷、辛硫磷等的结构进行分析,发现它们的共性结构为(C2H5O)2P(O)或(C2H5O)2P(S),于是选择乙氧基膦酸乙酸((C2H5O)2P(O)CH2COOH)作为通用半抗原(DPA)。通过活性酯法将半抗原(DPA)与不同的载体蛋白(BSA、OVA)偶联,制备了人工抗原。以其BSA偶联物作为免疫原免疫新西兰大白兔,获得两种多克隆抗体。以半抗原(DPA)和对氧磷作为小分子竞争物,对抗体及其免疫分析条件进行了筛选和试验,在优化条件下建立了针对对氧磷的标准抑制曲线和回归方程。在此基础上进行了其它结构类似化合物的抑制试验,测定了它们的交叉反应。结果表明,由DPA抗原产生的抗体对对氧磷和嘧啶磷表现一定的识别,两者的IC50分别为1.69μg/mL和2.33μg/mL,交叉反应率分别为13.3%和9.6%;对其他有机磷药物(对硫磷、毒死蜱、二嗪农、马拉硫磷)等没有识别作用。以包菜为样本,分别添加了对氧磷和嘧啶磷,二者的添加回收率分别为75.02%～78.37%和75.02%～78.37%;变异系数分别为3.04%～3.79%和2.82%～3.36%。

有机磷农药多残留免疫分析方法的研究

内容摘要

全文目录

相似论文