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EGCG经Wnt-1/β-catenin信号通路抑制NP69-LMP1细胞的生长

作 者: 蒋凯苓
导 师: 罗招阳
学 校: 南华大学
专 业: 病理学与病理生理学
关键词: EGCG NP69-LMP1细胞 细胞生长 Wnt-1蛋白 β-catenin蛋白
分类号: R285
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


目的:EB病毒在健康人群中广泛携带,其编码的潜伏性膜蛋白1(LMP1)是重要的致瘤蛋白,可诱导上皮细胞的恶性转化,本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体外抑制EB病毒LMP1转化鼻咽上皮细胞NP69生长的分子机制。方法:采用免疫荧光染色了解LMP1转化NP69细胞(NP69-LMP1)中的表达与定位;通过绘制细胞生长曲线观察NP69-LMP1的生长特点;MTT法检测EGCG抑制NP69-LMP1细胞生长的IC50值;选用细胞生长曲线、平皿克隆形成实验和软琼脂集落形成实验分析EGCG对NP69-LMP1细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测EGCG对NP69-LMP1细胞周期与凋亡的影响;采用RT-PCR和Western- blotting检测Wnt-1基因和蛋白的表达情况,同时运用Western- blotting检测EGCG处理NP69-LMP1细胞后β-catenin的表达及磷酸化。结果:1、LMP1转化后的NP69细胞生长加速,LMP1在细胞膜和细胞浆表达。2、EGCG抑制NP69-LMP1细胞生长的IC50值为47.7mg·L-1;细胞生长曲线、平皿克隆形成实验和软琼脂集落形成实验均显示随着EGCG浓度增加,处理时间延长,NP69-LMP1细胞生长抑制作用越明显(n=3,P<0.05)。3、流式细胞术结果显示,随着EGCG浓度的升高,G1期的NP69-LMP1细胞比例增加,S期细胞减少,细胞凋亡率逐渐增加(n=3,P<0.05)。4、RT-PCR和Western-blotting结果显示,随着EGCG浓度的升高,NP69-LMP1细胞中Wnt-1基因和蛋白的表达逐渐降低。5、NP69-LMP1细胞中β-catenin的表达随EGCG浓度的升高而逐渐降低,但其磷酸化增加。结论:1、EGCG通过G1/S期阻滞和诱导细胞凋亡而抑制NP69-LMP1细胞的生长。2、EGCG呈浓度依赖性抑制NP69-LMP1细胞中Wnt-1基因和蛋白的表达。3、EGCG通过降低NP69-LMP1细胞中Wnt-1蛋白,影响β-catenin蛋白表达及β-catenin磷酸化,发挥其抑制LMP1-NP69细胞的生长。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
英文缩写注解  8-9
前言  9-12
技术路线  12-13
材料与方法  13-20
  材料  13-15
  方法  15-20
结果  20-36
讨论  36-40
参考文献  40-46
结论  46-47
综述  47-56
  参考文献  51-56
攻读学位期间主要的研究成果  56-57
致谢  57

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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