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JBP485经PEPT1的摄取，转运和调节

作　者: 刘志浩
导　师: 刘克辛
学　校: 大连医科大学
专　业: 药理学
关键词: JBP485 PEPT1 摄取转运调节
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:JBP485(cyclo-trans-4-L-Hydroxyprolyl-L-serine,环状-反式-4-左旋-羟脯氨酰-左旋-丝氨酸)是从日本抗肝炎药物Laennec(人胎盘水解物)提取分离出来的一种有活性的二肽,目前已经用人工的方法合成。本研究组前期实验证明,JBP485在大鼠体内具有抗炎活性。本文主要通过大鼠体内外实验方法阐述JBP485经由寡肽转运体(PEPT1)的摄取、转运和调节机制。方法:建立灵敏、高效、快速的LC-MS/MS法检测Caco-2细胞裂解液以及大鼠血浆生物样品内JBP485的浓度以及含量。(1)Caco-2细胞摄取实验:在pH6.0和pH7.4情况下分别检测0.5 mM JBP485在细胞中摄取的时间依赖性曲线。同时在pH6.0情况下考察JBP485在细胞中摄取的浓度依赖性曲线,然后用PEPT1的典型底物甘氨酰肌氨酸(Gly-Sar)抑制JBP485的摄取,进而用Eadie–Hofstee图求算JBP485摄取的Km以及Vmax值。最后本文进一步考察了Gly-Sar,JBP923 (另一口服化学合成二肽),头孢氨苄(CEX ,已知PEPT1底物)等几种药物对JBP485摄取的抑制情况,并求算了摄取抑制常数Ki值。(2)Caco-2细胞转运实验:将Caco-2细胞种于Transwell小室中,考察0.5 mM JBP485从Caco-2细胞基顶侧(AP)到基底侧(BL)的转运情况,以及BL侧到AP侧的转运情况。同时检测了0.5 mM JBP485在转运过程中被Gly-Sar,JBP923,CEX的抑制情况以及胞内药物蓄积情况。(3)PEPT1的调节:首先通过维拉帕米,锌离子,乙醛等改变PEPT1的活性,然后考察0.25 mM JBP485摄取的变化情况。(4):PEPT1的体内调节:大鼠同时给予25 mg/kg JBP485和20 mg/kg维拉帕米,考察JBP485吸收的变化。连续6天用乙醇给大鼠灌胃,然后给予25 mg/kg JBP485,检测JBP485吸收的变化。(5):PEPT1 mRNA表达的变化:用5 mM JBP485在Caco-2细胞中温孵24 h,继而用PCR法检测PEPT1 mRNA表达的变化情况。结果:(1)在Caco-2细胞摄取实验中,JBP485的时间依赖性摄取具有良好的线性,而且在pH6.0的情况下JBP485的摄取显著高于在pH 7.4情况下的摄取。同时JBP485的浓度依赖性摄取可以显著地被Gly-Sar(6 mM)所抑制,并且抑制后JBP485摄取的Km值从1.76(mM)变为2.36(mM)。JBP485(0.5mM)的摄取可以显著地被不同浓度的Gly-Sar, JBP923, CEX所抑制。(2)在Caco-2细胞转运实验中, 0.5 mM JBP485在细胞基顶侧到基底侧的转运显著高于基底侧到基顶侧的转运。并且0.5 mM JBP485的转运可以被Gly-Sar,JBP923, CEX所抑制。(3)在PEPT1体外调节实验中,当Caco-2细胞事先给予0.1 mΜ钙通道阻滞剂维拉帕米后,JBP485的摄取与对照组相比提高了23%。当Caco-2细胞分别给予5 mM ZnSO4和1 mM乙醛后JBP485的摄取值分别降低了31%和24%。(4)在PEPT1的体内调节实验中,同时给予维拉帕米后JBP485的AUC与对照组相比提高了37%。当事先灌胃给予乙醇后,JBP485吸收的AUC值与对照组相比降低了43%。(5)在用PCR考察Caco-2细胞中PEPT1 mRNA表达的变化实验中,当用5 mM JBP485温孵细胞24 h后,细胞中PEPT1的表达可以显著提高。结论:(1):JBP485是PEPT1的底物,其吸收可以被PEPT1所介导。(2):当JBP485与维拉帕米合用,可以增加JBP485的吸收;当JBP485与锌离子和乙醛合用可以降低JBP485的吸收,这对指导临床合理用药有重要意义。(3): JBP485可以在mRNA水平增加PEPT1的表达。

全文目录

一、摘要  6-10
  （一）中文摘要  6-8
  （二）英文摘要  8-10
二、文献综述  10-23
  （一）正文  10-20
  （二）参考文献  20-23
三、正文  23-50
  （一）前言  23-24
  （二）材料和方法  24-33
  （三）结果  33-43
  （四）讨论  43-46
  （五）结论  46-47
  （六）参考文献  47-50
四、附录  50-51
五、致谢  51

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