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丁香酚对体外培养心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

作　者: 袁德俊
导　师: 吴启端
学　校: 广州中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 丁香酚 心肌细胞 缺氧/复氧
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


研究背景:丁香（Flos Caryophylli）系桃金娘科番桃属植物丁香（Eugenia caryo-phyllataThunb.）的干燥花蕾,又称公丁香。味辛,性温、归脾、胃、肾经。丁香属于中药中的温里药,具有温中驱寒、补肾助阳、温通血脉的功效,用于治疗脾胃虚寒,呃逆吐泻,心腹冷痛,肾虚阳痿。丁香气雄而善行,故上可达心肺“疗胸痹”（《本草汇》）,下可入肝肾“疗肾气,奔豚气,阴痛,壮阳暖腰膝”。丁香与郁金为主药的丁郁四神散可以治疗冠心病心绞痛,具有缓解心绞痛,改善心电图异常等方面的作用。丁香挥发油的主要成分为丁香酚,其相对含量可达80.33%。丁香酚可通过非竞争性对抗Ca2+催化反应,抑制羟自由基形成,保护细胞膜脂质免受氧化。丁香酚对Fenton反应生成的羟自由基有明显的清除作用,其活性高于羟自由基特异性清除剂甘露醇,其对核黄素-甲硫氨酸光照还原生成的活性氧也有清除作用,可以作为外源性的氧清除剂使用。日本的一项研究发现丁香酚可抑制黄嘌呤氧化酶活性,亦抑制化学产生超氧化物,因此认为其可直接捕获超氧化物。本课题考虑丁香酚是否可以通过清除心肌缺血/再灌注损伤产生的氧自由基而起到保护受损的心肌细胞的作用,值得进一步研究。研究目的:本实验采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）建立体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,观察丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞的影响,为丁香酚对心血管疾病的作用提供实验依据。研究方法:原代培养乳鼠心肌细胞,采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）建立体外培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,用倒置显微镜观察心肌细胞形态学变化,四唑盐（MTT）法测定细胞存活率,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位（MMP）,并测定其细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的活力,从而观察丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞的影响。研究结果:心肌细胞经Na2S2O4造模后细胞存活率、MMP、SOD含量下降,LDH、MDA升高。模型组细胞存活率、LDH与正常组相比,差异有显著的统计学意义（P＜0.001）,模型组细胞MMP、MDA含量、SOD活性与正常组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）;与模型组相比,丁香酚能显著提高缺氧/复氧损伤心肌细胞的细胞存活率,有降低LDH、MDA含量和提高SOD、MMP的趋势。研究结论:丁香酚能够显著提高由Na2S2O4造成的缺氧/复氧损伤心肌细胞的存活率,能在一定程度上降低损伤心肌细胞的LDH漏出量和MDA含量,有提高SOD活性和稳定心肌细胞MMP的趋势,提示丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞有一定的保护作用。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-10
引言  10-12
第一部分 文献研究  12-32
  1 中医对冠心病的认识  12-13
    1.1 中医对冠心病病因病机的认识及治疗原则  12
    1.2 中医药对冠心病的治疗方法及药理研究进展  12-13
    1.3 小结  13
  2 心肌缺血/再灌注损伤机制的研究进展  13-19
    2.1 氧自由基与心肌缺血/再灌注损伤  14-16
    2.2 钙超载  16
    2.3 血管内皮细胞功能  16-17
    2.4 心肌细胞凋亡  17-18
    2.5 粒细胞浸润学说  18
    2.6 能量代谢障碍,线粒体损伤  18
    2.8 胆红素  18-19
    2.9 小结  19
  3 心肌细胞培养研究进展  19-24
    3.1 实验动物  19-20
    3.2 心肌细胞的培养  20-23
    3.3 心肌细胞的应用  23-24
  4 心肌细胞缺氧/复氧损伤模型研究概况  24-26
    4.1 单纯物理性模型  24-25
    4.2 单纯化学性模型  25-26
    4.3 小结  26
  5 丁香及丁香酚研究进展  26-31
    5.1 丁香的主要成分研究  26-27
    5.2 丁香的药理作用  27-29
    5.3 丁香在临床上的应用  29-31
    5.4 小结  31
  6 立题依据  31-32
第二部分 实验研究  32-39
  1 实验材料  32-33
    1.1 实验动物  32
    1.2 实验试剂及药品  32
    1.3 主要耗材及仪器  32-33
    1.4 药物配制  33
  2 实验方法  33-35
    2.1 原代心肌细胞培养  33
    2.2 细胞形态学观察  33
    2.3 丁香酚对正常培养心肌细胞的影响  33-34
    2.4 缺氧/复氧模型的建立  34
    2.5 实验分组  34
    2.6 心肌细胞存活率测定  34
    2.7 心肌细胞LDH的测定  34
    2.8 心肌细胞SOD、MDA的测定  34-35
    2.9 流式细胞仪测定线粒体膜电位(MMP)  35
    2.10 统计学处理  35
  3 实验结果  35-39
    3.1 心肌细胞生长状态的观察  35
    3.2 丁香酚对正常培养心肌细胞存活率的影响  35-36
    3.3 Na_2S_2O_4不同浓度对心肌细胞的缺氧/复氧损伤研究  36-37
    3.4 丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞存活率、LDH的影响  37
    3.5 丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞MMP的影响  37-38
    3.6 丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞MDA、SOD的影响  38-39
第三部分 讨论  39-44
  1 模型的建立及评价  39-40
  2 阳性对照药的选择  40
  3 丁香酚对正常心肌细胞的影响  40-41
  4 丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞生长的影响  41-42
    4.1 丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞存活率的影响  41
    4.2 丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞MMP的影响  41-42
    4.3 丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞LDH的影响  42
    4.4 丁香酚对缺氧/复氧损伤心肌细胞MDA、SOD的影响  42
  5 问题与思考  42-44
结语与创新性  44-45
  1 结语  44
  2 创新性  44-45
今后的研究思路与设想  45-46
参考文献  46-52
附录  52-56
研究生在学期间发表论文情况  56-57
致谢  57

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