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2008年昆明手足口病肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型的检测

作　者: 郑琪
导　师: 夏晓玲；施丽斌；祝大丽；李艳红
学　校: 昆明医学院
专　业: 儿科学
关键词: 手足口病肠道病毒分子流行病学实时荧光定量PCR
分类号: R450
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的手足口病(Hand,Foot and Mouth Disease,HFMD)是婴幼儿时期常见的感染性疾病,由肠道病毒感染引起,主要病原为柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)和肠道病毒71型(EV71)。近年来,马来西亚、中国台湾、新加坡、澳大利亚等地不断有手足口病暴发流行,引起严重并发症,甚至死亡,这些严重病例均与EV71感染有关。我国每年都有手足口病的流行,但有关手足口病的病原构成及EV71感染情况报道尚少。2008年,中国多个地区暴发手足口病疫情,全国累计报告手足口病近25000例,其中34名儿童死亡。本研究针对2008年4～6月儿童手足口病流行期间的手足口病患儿进行病原学检测,以了解昆明市肠道病毒的感染情况,并为手足口病的综合防治和肠道病毒的动态监测提供依据。方法采集临床诊断为手足口病患儿的疱疹液、尿液及咽拭子标本,用实时荧光定量(Fluorescence Quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)方法对上述临床标本进行CoxA16和EV71病毒核酸的检测;对EV71阳性标本进行VP1基因节段的双向扩增,扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,与GenBank中的EV71参考毒株进行比较,依据VP1片段构建基因亲缘性关系树;同时收集HFMD患儿的临床流行病学资料,应用SPSS11.5软件对临床数据进行统计分析。结果1.25例患儿共采集58份标本,其中咽拭子21份、疱疹液12份、尿液25份,标本采集的平均时间为患病后2.17d;咽拭子标本病毒检出率为11/21(52.38%),疱疹液标本检出率9/12(75.00%),尿液标本中未检出病毒,本次实验疱疹液标本的病毒检出率较高;咽拭子标本的病毒拷贝数为(1.07±2.05)×105,疱疹液标本的病毒拷贝数为(4.21±1.10)×106,咽拭子和疱疹液标本的病毒载量差异无统计学意义。2.25例临床诊断为手足口病的患儿中,13例患儿为CoxA16阳性,阳性率为52%,5例患儿EV71阳性,阳性率为20%,两者之比为2.6:1。3.实时荧光定量PCR法检测CoxA16和EV71阳性率为72%,所检测病毒RNA的拷贝数为(2.99×102～3.70×107)/ml。4.从5例EV71阳性标本中选取2株,对其VP1节段的核苷酸进行序列测定和分析,与基因库中其他12个分离株的相应VP1节段进行核苷酸序列比对;与GenBank中的EV71参考毒株进行基因亲缘性关系比较,证实实验获得的2株EV71均为C基因型,与中国内地流行的基因型基本一致。5.针对实验获得的EV71毒株构建基于VP1节段的种系进化树,2株EV71毒株与A、B基因型参考毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别为82.4%～84.5%和92.9%～95.0%;而与C基因型中的C4亚型代表株的核苷酸同源性高达94.0%～98.4%,在系统发生树上,这两株EV71毒株与C4亚型的11株毒株同属一个分支,证实本次实验从手足口病患者中分离到的EV71毒株属C4亚型。6.本次研究检测到的EV71病毒株与广州、深圳、武汉和上海地区的EV71流行株在核苷酸组成上有很大相似性,分析基因亲缘关系并结合种系进化树推断,我国大陆地区流行的EV71病毒株同属一组;中国大陆流行的EV71病毒株与EV71标准株BrCr-CA-70和嗜神经毒株MS的同源性较低(分别为78%和84%),与日本和匈牙利HFMD暴发时的流行株在遗传进化上也相距较远(同源性分别为80%和82%),说明EV71的流行存在地区差异。7.本次研究中HFMD的患儿均有手、足、口或臀部、肘部等部位的皮疹或溃疡,病程为5～11天,平均7天,部分患儿在病程初期出现发热、乏力、饮食减少等全身症状,综合临床观察,HFMD患者症状均较轻,未发现重症患儿。CoxA16和EV71感染患儿的临床表现相似,临床难以鉴别。8.所有病例中年龄最大的为6岁,最小的1岁6个月,2岁～4岁幼儿所占比例最高,为59.3%(32/54),0～2岁和4～5岁组各占14.8%(8/54),5岁以上患儿共6例,占11.1%,54例患儿中,幼托儿童占50%(27/54),有明确接触史的占33.33%(18/54)。本次HFMD流行有较明显的幼儿园和家庭聚集发病现象。结论1.CoxA16和EV71是本次本地区HFMD流行的主要致病病毒。2.实验获得的2株EV71均为C基因型,与中国内地流行的基因型基本一致,构建种系进化树,进一步证实本次实验从手足口病患者中检测到的EV71毒株属C4亚型,与EV71标准株BrCr-CA-70和嗜神经毒株MS的同源性较低。3.本次手足口病流行,CoxA16阳性患儿和EV71阳性患儿的症状均较轻,临床表现相似,临床难以区别。4.所采集的HFMD患者的临床标本中,疱疹液标本的病毒检出率较高,咽拭子标本次之,咽拭子和疱疹液标本的病毒载量差异无统计学意义。5.本次实验HFMD患者的尿液标本中未检测到致病病毒。

全文目录

中文摘要  5-8
英文摘要  8-11
论文正文  11-39
  前言  11-14
  材料和方法  14-21
  结果  21-31
  讨论  31-38
  结论  38-39
参考文献  39-44
综述  44-53
攻读硕士学位期间发表文章情况  53-54
致谢  54

2008年昆明手足口病肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型的检测

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