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地塞米松对顺铂引起的人肺腺癌细胞SPC-A1凋亡的抑制作用及其分子机制的初步探讨

作　者: 曹菲
导　师: 张智慧
学　校: 广西医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: Dexamethasone Glucocorticoids receptor Lung cancer Chemotherapy Anti-apoptosis
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:研究地塞米松(DEX)对顺铂(CDDP)引起的人肺腺癌细胞SPC-A1凋亡的抑制作用及探讨其初步的分子机制。方法:采用人肺腺癌细胞SPC-A1,分别加入不同浓度的DEX体外诱导培养,24小时后加入不同浓度的CDDP继续培养48小时,用MTT法检测细胞的存活率:再用1μmol/LDEX刺激SPC-A1细胞,分别于1hr、2hr、4hr、6hr、12hr提取细胞的总RNA;采用半定量RT-PCR技术,检测SPC-A1细胞中的血清/糖皮质激素-诱导激酶(SGK-1)和有丝分裂原蛋白激酶(MKP-1)的表达;同时用生物素标记的抗糖皮质激素受体(GR)抗体对SPC-A1细胞行免疫组化染色来检测GR的表达。结果:SPC-A1细胞经DEX诱导后,对CDDP所致的凋亡有抵抗作用并与DEX浓度呈剂量依赖关系。DEX刺激后的SPC-A1细胞表达SGK-1,在12hr时表达达高峰;细胞免疫组化显示SPC-A1细胞经DEX刺激后GR上调,细胞内GR表达的阳性细胞数明显高于对照组;没有检测到MKP-1表达。结论:DEX对CDDP引起SPC-A1细胞的凋亡有抑制作用。可能的分子机理是通过上调细胞内GR表达,上调其通路下游抗凋亡蛋白SGK-1的表达,导致SPC-A1细胞产生抗凋亡作用。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
第1章前言  8-9
第2章技术路线  9-10
第3章材料与方法  10-25
  3.1 实验材料  10-12
    3.1.1 细胞来源与培养基  10
    3.1.2 实验器材、药品及主要试剂  10-12
  3.2 实验方法  12-24
    3.2.1 实验试剂的配制  12-14
    3.2.2 细胞复苏、培养、传代与收集  14-24
  3.3 统计学处理  24-25
第4章实验结果  25-35
  4.1 MTT法测定DEX诱导肺腺癌细胞SPC-A1对CDDP的反应  25-27
  4.2 RT-PCR检测目的基因SGK-1、MKP-1的表达  27-30
  4.3 细胞免疫组化检测GR的表达  30-34
  4.4 结果分析  34-35
第5章讨论  35-37
第6章结论  37-38
第7章论文参考文献  38-40
第8章综述  40-50
  8.1 GC诱导抗凋亡GR-PI3-K-SGK-1/Akt及GR-组织形成、细胞外基质、细胞间接触、E-钙黏蛋白等复杂信号通路  41-42
  8.2 GC诱导抗凋亡丝裂原蛋白激酶(m itogen-activa-ted protein kinase phosphatase-1,MKP-1)信号通路  42-43
  8.3 GC诱导抗凋亡GR-NF-κB信号通路  43-44
  8.4 GC诱导抗凋亡GR-W nt信号通路  44-45
  8.5 讨论  45-47
  8.6 参考文献  47-50
第9章附录  50-52
第10章致谢  52-53
发表论文  53

地塞米松对顺铂引起的人肺腺癌细胞SPC-A1凋亡的抑制作用及其分子机制的初步探讨

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