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桑椹成熟期营养成分变化及差异蛋白质组的研究

作 者: 池旭娟
导 师: 谈建中
学 校: 苏州大学
专 业: 特种经济动物饲养
关键词: 桑堪 成熟期 营养成分 差异蛋白质组 基因克隆
分类号: S663.9
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 122次
引 用: 1次
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内容摘要


桑椹营养成分丰富,具有很好的保健效果和药用价值,作为天然无公害的绿色食品,已被列入既是食品又是药品的保健品行列。桑椹资源综合利用具有良好的发展前景,但是桑椹成熟期短,上市集中,且不耐贮存。因此,桑椹保鲜是桑椹产业中的重要研究课题,对桑椹生理及成熟期分子调控机理的研究具有理论与实践的意义。本文以果桑品种大10和SG01为材料,对其不同成熟阶段(绿熟期、半熟期、全熟期)营养成分的变化进行了比较分析,应用蛋白质组学及分子生物学技术,对桑椹成熟过程中差异表达蛋白质组分析,克隆了成熟特异性表达基因细胞壁转化酶的部分序列。本研究取得了以下结果:1.桑椹的蛋白质、粗灰分和Ca2+含量随着成熟过程而减少,可溶性糖、糖酸比、维生素C含量增加,2个供试果桑材料表现相似的倾向,其中,可溶性糖、糖酸比、维生素C含量都是大10品种高于SG01。2.分别以桑叶和桑椹为材料,对蛋白质双向电泳的样品制备技术进行了探讨,在蛋白质样品的色泽,溶解性及电泳分离效果等多个评价指标方面,改良的蛋白质提取法更适于桑叶与桑椹蛋白质双向电泳的技术要求。3.以SDS-PAGE和2DE两种方法比较不同组织蛋白质的差异表达,结果得到表达量相差2倍以上的蛋白组分有22个,桑椹绿熟期特异性斑点2个,全熟期特异表达3个。对桑椹不同成熟阶段的差异蛋白质进行了双向电泳分析,得到表达量差异2倍以上的蛋白点32个,其中在全熟期表达量最大的蛋白点6个。4.选择表达量差异在2倍以上的8个凝胶斑点进行胶内酶切质谱分析,通过检索数据库进行蛋白质鉴定与功能预测,结果表明,有3个蛋白点组分与光合作用有关,3个与低温胁迫有关,1个直接与糖代谢相关。5.根据蛋白质的鉴定结果,在分析前人研究工作的基础上,对与糖代谢相关的细胞壁转化酶基因(CWI)进行了克隆,DNA序列及生物信息学分析,表明桑椹CWI基因与白杨、西红柿CWI具有较高的同源性,而与水稻、小麦的同源性较差。且克隆片段序列具有较高的保守性。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-9
前言  9-11
第一章 果实成熟调控及其分子生物学研究  11-26
  1.1果实成熟的生理生化  11-13
    1.1.1 糖积累  11-12
    1.1.2 酸代谢  12
    1.1.3 维生素  12
    1.1.4 色素  12
    1.1.5 单宁  12
    1.1.6 芳香物质  12-13
  1.2 果实成熟的分子调控  13-19
    1.2.1 激素与果实成熟的关系  13-14
    1.2.2 相关酶类对果实成熟的影响  14-19
  1.3 蛋白质组学研究  19-22
    1.3.1 蛋白质组学的研究背景及意义  19
    1.3.2 蛋白质组学研究的技术路线及相关技术  19-21
    1.3.3 质谱技术  21-22
    1.3.4 蛋白质的生物信息学分析  22
  1.4 桑椹生物学特性与生理生化的研究概况  22-24
    1.4.1 桑树果实与种子  22-23
    1.4.2 桑椹营养成分的研究  23
    1.4.3 桑椹成熟相关生理生化的研究  23-24
    1.4.4 资源利用研究  24
  1.5 本文研究背景及技术路线  24-26
第二章 桑椹成熟期营养成分动态变化的分析  26-32
  2.1 材料与方法  26-27
    2.1.1 植物材料  26
    2.1.2 试验方法  26-27
  2.2 结果与分析  27-30
    2.2.1 不同成熟期桑椹蛋白质含量的变化  27
    2.2.2 不同成熟期桑椹糖酸比的变化  27-28
    2.2.3 不同成熟期桑椹维生素C含量的变化  28-29
    2.2.4 不同成熟期桑椹矿质元素含量的变化  29-30
  2.3 讨论  30-32
    2.3.1 维生素C提取方法的选择  30
    2.3.2 桑椹可溶性糖含量变化的生理学基础  30
    2.3.3 影响桑椹酸度变化的主要因素  30-31
    2.3.4 桑椹成熟程度与Vc含量变化的关系  31-32
第三章 桑椹成熟期差异蛋白质组研究  32-49
  3.1 材料与方法  32-35
    3.1.1 试验材料  32-33
    3.1.2 试剂和仪器  33
    3.1.3 桑椹蛋白质的SDS-PAGE  33-34
    3.1.4 桑椹蛋白质双向电泳分析技术  34-35
  3.2 结果分析  35-47
    3.2.1 桑椹蛋白电泳样品制备技术的优化  35-37
    3.2.2 桑堪与桑叶差异蛋白质的电泳分析  37-40
    3.2.3 桑椹成熟过程中差异表达蛋白质组的2-DE分析  40-43
    3.2.4 桑椹成熟期差异表达蛋白质的质谱分析与鉴定  43-47
  3.3 讨论  47-49
    3.3.1 样品制备方法的优化  47
    3.3.2 关于蛋白差异点的比对标准  47
    3.3.3 桑椹成熟过程中蛋白质的差异表达  47-49
第四章 桑椹细胞壁转化酶基因的克隆及分析  49-60
  4.1 材料和方法  49-52
    4.1.1 植物材料  49
    4.1.2 主要的数据库与软件  49
    4.1.3 主要试剂和仪器  49
    4.1.4 方法  49-52
  4.2 结果与分析  52-58
    4.2.1 桑树基因组DNA的提取及质量鉴定  52
    4.2.2 PCR产物的扩增和克隆  52-53
    4.2.3 桑椹细胞壁转化酶基因的序列分析  53-58
  4.3 讨论  58-60
结论  60-61
参考文献  61-73
攻读硕士学位期间发表的论文  73-74
致谢  74

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 果树园艺 > 浆果类 > 其他
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