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17α雌二醇对APP/PS1 N₂a基因转染细胞Aβ生成的影响及其机制的研究

作　者: 曾杰
导　师: 雷德亮
学　校: 中南大学
专　业: 神经生物学
关键词: 17α雌二醇（E2α）神经母细胞瘤细胞株 APP/PS1 β-淀粉样蛋白
分类号: R739.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：探讨17α雌二醇(E2α)对稳定表达人APP/PS1基因的神经母细胞瘤细胞株(Neuro-2a) (APP/PS1 N2a)β-淀粉样蛋白(Aβ)产生的影响及可能机制。方法：将APP/PS1N2a细胞用10 nM E2α预处理2天,更换培养液后,分别进行如下处理：(1)加入不同浓度E2α(25nM,50nM,100nM,200nM)和溶媒(对照组),用Western-blot检测APP/PS1N2a细胞内和细胞外的Ap蛋白水平及细胞BACE1蛋白水平；(2)加入100 nM E2α、20 mM葡萄糖和5 mU葡萄糖氧化酶(glucose oxidase, GOX),在培养液中GOX可以分解G并产生H202,对细胞造成氧化损伤。24h后,进行DHE染色观察APP/PS1 N2a细胞中活性氧(ROS)含量的变化。结果：不同浓度E2α(25nM,50nM,100nM,200nM)处理后,细胞外Ap蛋白水平明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)；而细胞内Ap蛋白水平无明显变化(P>0.05)；细胞BACE1的表达水平无明显变化(P>0.05)；E2α可以减少G/GOX所致APP/PS1 N2a细胞ROS的产生。结论：E2α可以减少细胞外Ap的产生,其机制可能与其抗氧化损伤有关。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
英文缩略词简表  7-8
前言  8-11
第一章材料与方法  11-15
  1.1 实验材料  11
  1.2 主要试剂  11-12
    1.2.1 细胞培养试剂  11
    1.2.2 DHE染色试剂  11
    1.2.3 Western blot主要试剂  11-12
  1.3 主要仪器  12
  1.4 实验方法  12-15
    1.4.1 细胞培养  12-13
    1.4.2 Western blot检测  13-14
    1.4.3 DHE染色  14-15
第二章结果  15-18
  2.1 APP/PS1 N_2a细胞内、外Aβ蛋白水平的Western-blot检测  15-16
  2.2 APP/PS1 N_2a细胞内BACE1表达水平的Western-blot检测  16-17
  2.3 APP/PS1 N_2a细胞内ROS的DHE荧光染色  17-18
第三章讨论  18-21
  3.1 E_2α可以减少eAβ的产生  18-19
  3.2 E_2α抑制Aβ生成的可能机制  19-21
第四章结论  21-22
参考文献  22-26
综述  26-38
  参考文献  33-38
致谢  38

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