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大黄素对脂肪变性LO2肝细胞SREBP-1c mRNA表达的影响

作　者: 谢芳
导　师: 杨钦河
学　校: 暨南大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 大黄素人肝L02细胞肝细胞脂肪变性 SREBP-1c mRNA
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:观察大黄素对脂肪变性肝细胞SREBP-1c mRNA表达的影响,探讨其对脂变肝细胞的降脂作用和机制。方法:(1)以人肝L02细胞为研究对象,用含体积分数为50%灭活小牛血清的RPMI-1640培养基分别孵育人肝L02细胞24h、48h、72h,筛选制备肝细胞脂肪变性模型的最佳时间。(2)应用MTT法筛选大黄素作用于脂肪变性肝细胞的适合浓度。(3)造模成功后,设模型组、自然恢复组、大黄素5μM组及大黄素10μM组,同时设正常对照组,并设24h、48h两个治疗时间段。油红O染色观察不同组别细胞形态和细胞内脂滴的形成情况,全自动生化分析仪检测细胞内甘油三酯的含量,以确定大黄素改善肝细胞脂肪变性的最佳浓度及最佳时间。(4)采用半定量RT-PCR法检测各组治疗24h后肝细胞内SREBP-1c mRNA的表达。结果:(1)用含体积分数为50%灭活小牛血清的RPMI-1640培养基孵育人肝L02细胞48h、72h成功制备肝细胞脂肪变性模型。油红O染色后倒置显微镜下观察,模型组肝细胞肿大,细胞浆内见大量红色和橘红色的小泡性脂滴;全自动生化分析仪检测模型组细胞培养上清ALT、AST、ALP及LDH较正常组均显著升高(P＜0.01);与正常组比较,细胞内TG含量具有显著性差异(P＜0.01)。(2)通过MTT法筛选出大黄素作用的安全浓度为1μM、2.5μM、5μM和10μM,本实验采用5μM和10μM作为大黄素的作用浓度。(3)大黄素治疗24h后,自然恢复组肝细胞内TG含量与模型组比较明显降低(P＜0.01);与自然恢复组比较,大黄素10μM组肝细胞内TG含量明显降低,差别有统计学意义(P＜0.05),而5μM组无明显降低(P＞0.05)。油红O染色结果显示:模型组细胞浆内见大量红色和橘红色的脂滴,正常组、自然恢复组和大黄素治疗组细胞浆内脂滴数和脂滴的颜色较模型组明显减少,其中大黄素10μM组减少最为明显。(4)大黄素治疗48h后,与模型组比较,自然恢复组肝细胞内TG含量明显降低(P＜0.01);与自然恢复组比较,大黄素各治疗组肝细胞内TG含量均无统计学意义(P＞0.05)。油红O染色结果显示:模型组细胞浆内见大量红色和橘红色的脂滴,正常组、自然恢复组和大黄素治疗组细胞浆内脂滴数和脂滴的颜色较模型组明显减少。但大黄素各治疗组与自然恢复组之间比较镜下观无明显差异。(5)大黄素治疗24h后,模型组SREBP-1c mRNA表达较正常组明显增强(P＜0.01);自然恢复组SREBP-1c mRNA表达较模型组略有减弱,但无统计学意义(P＞0.05);经不同浓度大黄素治疗后,与自然恢复组相比,SREBP-1c mRNA表达无显著性差异(P＞0.05)。结论:(1)用含体积分数为50%灭活小牛血清的RPMI-1640培养基孵育正常人肝L02细胞48h、72h均可成功复制肝细胞脂肪变性模型。(2)大黄素具有降低体外脂肪变性人肝L02细胞内TG含量的作用,以10μM浓度治疗24h的效果较为明显。(3)脂质在肝细胞内的沉积可能与细胞内SREBP-1c mRNA表达上调有关。大黄素降低肝细胞内TG的作用可能与脂质代谢其他相关基因的调控有关。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-10
前言  10-12
实验研究  12
1 材料  12-14
  1.1 细胞来源  12
  1.2 主要试剂和药物  12
  1.3 主要仪器及设备  12-13
  1.4 主要试剂的配制  13-14
2 方法  14-22
  2.1 细胞培养与传代,冻存与复苏  14-15
  2.2 肝细胞脂肪变性模型的建立  15-16
  2.3 MTT法筛选不同时间段大黄素作用浓度  16-17
  2.4 不同浓度大黄素对脂肪变性人肝L02细胞的治疗作用  17-18
  2.5 RT-PCR方法检测各组肝细胞SREBP-1c mRNA的表达  18-21
  2.6 统计学方法  21-22
3 结果  22-31
  3.1 复制肝细胞脂肪变性模型最适合时间的确定  22-24
  3.2 MTT法筛选不同时间段大黄素作用的浓度  24-26
  3.3 不同浓度大黄素治疗脂肪变性肝细胞的结果  26-29
  3.4 大黄素对肝细胞SREBP-1c mRNA表达的影响  29-31
讨论  31-43
  1 NAFLD的国内外研究现状和发展趋势  31-35
    1.1 NAFLD的发病机制  31-32
    1.2 NAFLD的临床表现、诊断及治疗  32-35
  2 脂肪变性人肝L02细胞模型的建立  35-37
    2.1 NAFLD实验模型的研究现状  35-36
    2.2 人肝L02细胞脂肪变模型的建立与筛选  36-37
  3 大黄素对脂肪变性人肝L02细胞TG含量的影响  37-39
  4 从中医药理论的角度探讨大黄素降脂作用  39-41
  5 脂肪变性人肝L-02细胞SREBP-1c mRNA表达的变化及大黄素对其的影响  41-43
结论  43
展望  43-44
参考文献  44-51
缩略词表  51-52
附图一:造模不同时间段细胞油红O染色图片  52-53
附图二:不同浓度大黄素治疗24h后油红O染色图片  53-54
附图三:不同浓度大黄素治疗48h后油红O染色图片  54-55
读研期间参研课题及发表的论文  55-56
致谢  56

大黄素对脂肪变性LO2肝细胞SREBP-1c mRNA表达的影响

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