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内质网应激诱导的细胞凋亡在慢性牙周炎中的作用初探

作　者: 聂敏
导　师: 何健民
学　校: 兰州大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 牙周炎内质网应激 GRP78 CHOP
分类号: R781.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：慢性牙周炎可以导致牙龈组织炎症、牙周袋形成、进行性附着丧失和牙槽骨丧失,最后可能导致牙松动和被拔除,它是我国成年人丧失牙齿的主要原因。本研究通过分别检测牙周炎患者及健康成人牙周组织中细胞凋亡的发生,来检测细胞凋亡与牙周炎的关系。细胞凋亡是一种由基因控制、形态学特征与坏死截然不同的自主性死亡形式。其形态学表现为：细胞皱缩、染色质浓集并常伴胞核片段化、胞膜内陷并包裹胞内成分形成“泡”样结构(即凋亡小体)。内质网应激是引起细胞凋亡的一条重要通路,在有压力导致内质网应激时,可以引起未折叠蛋白或者错误折叠蛋白在内质网内的聚集,从而引起未折叠蛋白反应,未折叠蛋白反应可以减少未折叠蛋白和错误折叠蛋白在内质网内的聚集,从而减除内质网的压力,当这些促生存响应不能缓解内质网应激的压力时,则会引起细胞凋亡。本研究通过检测内质网应激的相关蛋白来探讨内质网应激诱导的细胞凋亡与慢性牙周炎之间的相关性。方法：根据1999年的牙周炎分类法,在拔牙患者中选取成人牙周炎18例,健康成人12例,经患者同意后在拔牙后分离牙龈上皮约4mm3,分别利用光学显微镜和透射电镜观察牙周组织中的凋亡细胞,免疫组化染色法检测慢性牙周炎患者及牙周健康者牙周组织中GRP78和CHOP的分布及含量变化。结果：1.组织病理学观察(HE染色)光学显微镜下可见慢性牙周炎患者牙周组织中上皮钉突周围有大量炎症细胞浸润,以淋巴细胞、单核细胞和浆细胞多见,基底层细胞紊乱,上皮多发生糜烂,表层显著增厚,钉突呈弓状吻合,棘细胞层和基底层细胞可见少数胞浆收缩,细胞核固缩浓染,核膜消失,部分细胞核破碎,呈现凋亡状态,胶原纤维排列紊乱。部分纤维发生断裂,固有层水肿,变性,部分血管增生,扩张,允血。正常组牙龈组织上皮钉突呈锯齿状,炎性细胞较少,上皮分层清晰,基底细胞连续整齐,固有层中胶原纤维排列整齐,极少有充血、出血及水肿现象。2.透射电子显微镜观察结果电镜下观察慢性牙周炎组织中浆细胞变性,细胞染色质浓缩,形成致密的半球形或新月体形的帽状结构,附于核膜边缘,其核膜和粗面内质网均有不同程度的变化,核从正常形态趋于固缩、破碎,细胞表面结构如微绒毛等减少甚至消失。内质网腔从狭窄到扩张直至呈囊泡化,卢氏体出现,呈现凋亡状态。3.免疫组化染色结果GRP78在正常牙周组织中表达较少,仅在上皮表层有阳性表达,；GRP78在慢性牙周炎组织中上皮全层和固有层均有明显表达,且主要表达在紧靠细胞核周围的胞质中,。CHOP在正常牙周组织中几乎没有表达,；CHOP在慢性牙周炎组织中表达明显,主要表达在上皮表层和固有层中。GRP78和CHOP在慢性牙周炎组的表达均明显多于在正常组的表达(P<0.05)。结论：慢性牙周炎患者牙龈组织较之正常牙龈组织中的细胞凋亡现象明显,内质网应激诱导细胞凋亡的相关蛋白GRP78和CHOP在慢性牙周炎组的表达均明显多于在正常组的表达,说明内质网应激参与了慢性牙周炎的病理生理过程。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-7
目录  7-9
前言  9-15
  1.死亡受体途径凋亡通路  9-10
    1.1.Fas-FADD-Caspase凋亡通路  10
    1.2.Fas-鞘磷脂-神经酰胺凋亡通路  10
    1.3.Fas-Daxx凋亡通路  10
  2.线粒体途径  10-11
    2.1 线粒体跨膜电位ψm的改变  10-11
    2.2 线粒体氧自由基  11
    2.3 Bcl-2基因家族  11
  3.内质网应激(endoplasmic reticul um stress,ERS)  11-15
    3.1 内质网应激介导的生存途径  12-13
    3.2 内质网应激介导的促凋亡途径  13-15
第一部分牙周组织光镜及电镜观察  15-20
  1.1 主要试剂和仪器  15
    1.1.1 主要试剂  15
  1.2 方法  15-17
    1.2.1 病例选择  15-16
    1.2.2 标本采集及制作  16
    1.2.3 HE染色  16
    1.2.4 电子显微镜技术  16-17
  1.3 结果  17
    1.3.1 HE染色结果  17
    1.3.2 透射电子显微镜观察结果  17
  1.4 讨论  17-19
  1.5 结论  19-20
第二部分牙周组织中GRP78和CHOP的检测  20-25
  2.1 主要试剂和仪器  20
    2.1.1 主要试剂  20
    2.1.2 主要仪器  20
  2.2 方法  20-22
    2.2.1 病例选择  20-21
    2.2.2 标本采集及制作  21
    2.2.3 免疫组化染色  21
    2.2.4 统计分析  21-22
  2.3 免疫组化染色结果  22-23
  2.4 讨论  23-24
  2.5 结论  24-25
参考文献  25-29
综述  29-35
  参考文献  34-35
在学期间的研究成果  35-36
致谢  36

内质网应激诱导的细胞凋亡在慢性牙周炎中的作用初探

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