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单链DNA结合蛋白与单链DNA相互作用的AFM研究

作　者: 李金京
导　师: 张文科
学　校: 吉林大学
专　业: 物理化学
关键词: 原子力显微镜单分子力谱核酸与蛋白相互作用
分类号: Q67
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

核酸与蛋白质是构成生命的重要物质,二者的相互作用在诸如生长、繁殖、遗传和代谢等生命现象中发挥着重要的作用。从单分子水平上对它们的相互作用进行纳米探测,有利于人们更加深入地理解与调控这些重要的生理过程,是人们解开生命奥秘的关键所在。原子力显微镜(AFM)成像可以直观地给出分子间相互作用的模式,而基于原子力显微镜的单分子力谱技术可以定量给出分子间相互作用的强度。本论文中首先用滚环复制的方法制备了一种具有重复序列的长的单链DNA,并且使之与单个重复序列的互补链段进行互补,对这两种DNA定量地进行了单分子力谱研究。然后使单链DNA与枯草芽孢杆菌的单链DNA结合蛋白(SSB protein)结合,通过原子力显微镜的扫描成像功能对其结合模式进行了表征,并结合了单分子力谱的方法,尝试了用这种长的单链DNA片段作为基底,直接与天然SSB作用,通过对比纯的单链DNA以及天然SSB蛋白存在下单链DNA力学性质的差异,定量获得SSB蛋白与单链DNA的结合强度信息。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-8
第一章前言  8-35
  1.1 原子力显微镜工作原理  8-10
  1.2 基于原子力显微镜技术的单分子力谱工作原理  10-16
    1.2.1 力-拉伸曲线的获得  11-13
    1.2.2 力-拉伸曲线的物理意义  13-15
    1.2.3 获得单链拉伸的判断标准  15-16
  1.3 单分子力谱在生物各个领域的应用  16-30
    1.3.1 双链DNA分子的拉伸  16-20
    1.3.2 多糖分子的拉伸  20-21
    1.3.3 蛋白质分子的拉伸  21-24
    1.3.4 蛋白折叠动力学的研究  24-27
    1.3.5 细胞的拉伸  27-30
  1.4 本文的研究思路  30-31
  参考文献  31-35
第二章单链DNA结合蛋白与单链DNA相互作用的AFM研究  35-57
  2.1 引言  35-36
  2.2 实验部分  36-43
    2.2.1 利用滚环复制制备带有重复序列的单链DNA  36-40
    2.2.2 带缺口的双链DNA的制备  40
    2.2.3 天然SSB蛋白的纯化  40-42
    2.2.4 AFM样品制备  42-43
  2.3 结果与讨论  43-56
    2.3.1 AFM扫描图分析  43-51
    2.3.2 单分子力谱研究单链DNA及其与SSB形成的复合物  51-56
  2.4 本章小结  56-57
参考文献  57-58
作者简介  58-59
致谢  59

单链DNA结合蛋白与单链DNA相互作用的AFM研究

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