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流动状态下ADAMTS13羧基端的功能研究
作 者: 孙婧
导 师: 艾继辉
学 校: 华中科技大学
专 业: 妇产科学
关键词: ADAMTS13 重组体 COS7细胞 瞬时转染 剪切力 Flow-Chamber
分类号: R341
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 4次
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内容摘要
【目的】研究ADAMTS13及其重组体蛋白于体外剪切力条件下裂解VWF,降低血小板黏附能力的差异。【方法】(1)将ADAMTS13及其重组体质粒转化扩增,并大量提取,同时双酶切琼脂糖凝胶电泳鉴定各质粒。(2)将已扩增并鉴定正确的ADAMTS13及其重组体质粒转染入COS7细胞,收集瞬时表达ADAMTS13及其重组体蛋白的细胞培养上清,通过超滤管获得初步纯化的重组蛋白,Western-Blot检测各瞬时表达细胞分泌的蛋白。(3)利用流体力学装置Flow-Chamber(平板流动小室)培养人脐静脉内皮细胞,并通过蠕动泵加压流动培养基模拟人体血管内流动状态,检测ADAMTS13及其重组体蛋白对于损伤的人脐静脉内皮细胞分泌的UL-VWF的裂解作用以及下调血小板黏附、延缓血栓形成的能力差异。【结果】(1)成功在真核表达细胞内瞬时表达ADAMTS13及其重组体蛋白,通过简单纯化各种表达蛋白,Western-Blot证实为正确分子量。(2)在Flow-Chamber模拟人体血管内剪切力作用下,全长FL(Full length)蛋白和MDTCS(截除羧基端TSP2-8和CUB1+2片段)蛋白可以不同程度的抑制血小板凝集,delCUB(截除羧基端CUB1+2片段)蛋白抑制血小板凝集的能力显著下降。【结论】(1)成功瞬时表达全长ADAMTS13及其重组体蛋白。(2)初步证实:流动状态下,ADAMTS13羧基端是参与裂解VWF以抑制血小板凝集的主要区域。
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全文目录
中文摘要 5-6 英文摘要 6-8 前言 8-11 材料和方法 11-25 结果 25-31 讨论 31-34 小结 34-38 综述 38-56 参考文献 50-56 附录 56-57 致谢 57
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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生物化学、分子生物学
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