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小麦、拟南芥低温相关基因ADK、PBI的克隆与表达分析

作 者: 史孟君
导 师: 何光源;熊志勇
学 校: 华中科技大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 小麦 cDNA-AFLP 低温胁迫 AtADK AtPBI 拟南芥
分类号: Q943.2
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 38次
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内容摘要


小麦是中国乃至世界上一种重要的农作物,低温危害是影响小麦生产的主要环境因素之一。因此,培育能抗低温小麦新品种尤其重要。挖掘小麦抗低温相关基因,运用转基因技术提高小麦抗低温性已成为重要研究方向。本研究利用cDNA-AFLP的方法从受低温诱导的小麦中分离到ADK和PBI基因,并对其表达分析,进行了分析和初步的功能验证,为以后的提高小麦抗低温性的分子机理和育种实践研究奠定了一定的基础。.研究结果如下:(1)利用cDNA-AFLP的方法从小麦中成功分离出4个受低温影响的的基因片段;通过RT-PCR进一步证实,这些基因表达受低温影响,其中两个基因表达量上调,另外两个基因表达量下调。(2)对表达量的下调的两个基因,从模式植物拟南芥中克隆出其基因全长,分别命名为AtADK和AtPBI,全长分别为1767 bp和591 bp。(3)应用半定量RT-PCR法对拟南芥中AtADK和AtPBI基因进行表达分析,发现AtADK和AtPBI基因的表达不仅受到低温影响,同时也受到激素和盐的诱导。(4)由于AtADK和AtPBI基因的功能未知,为了研究其在植株生长发育过程中及其在胁迫环境时的功能和作用,构建了AtADK和AtPBI基因的真核表达载体,通过农杆菌介导的花粉管通道法,转入拟南芥中,得到了T0代转基因种子,为进一步验证AtPBI和AtADK基因的功能奠定了基础。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-8
1 绪论  8-19
  1.1 小麦生产及低温冻害现状  8-9
  1.2 小麦低温抗性育种研究现状  9-10
  1.3 小麦的抗寒机制研究  10-15
  1.4 差异基因分离方法及cDNA-AFLP 技术  15-17
  1.5 本研究的目的及意义  17-18
  1.6 本研究的技术路线  18-19
2 小麦低温抗性相关基因的分离  19-33
  2.1 绪言  19
  2.2 实验材料  19-21
  2.3 实验方法  21-28
  2.4 结果与分析  28-30
  2.5 讨论  30-32
  2.6 小结  32-33
3 AtADK 基因的克隆及表达分析  33-46
  3.1 绪言  33-34
  3.2 实验材料  34
  3.3 实验方法  34-39
  3.4 结果分析  39-44
  3.5 讨论  44-45
  3.6 小结  45-46
4 AtPBI 的克隆及表达分析  46-55
  4.1 绪言  46
  4.2 实验材料  46
  4.3 实验方法  46-49
  4.4 结果与分析  49-53
  4.5 讨论  53-54
  4.6 小结  54-55
5 总结与展望  55-58
  5.1 总结  55-56
  5.2 展望  56-58
致谢  58-59
参考文献  59-65
附录1 攻读硕士学位期间发表的论文目录  65-66
附录2 质粒图谱  66

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
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