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蜂王浆中10-HDA对新生大鼠小脑神经细胞增殖和存活的影响

作　者: 高荣敬
导　师: 钟方旭
学　校: 武汉工业学院
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 小脑细胞 10-HDA 增殖存活
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本课题以出生48h内的SD大鼠的小脑神经细胞为研究对象,探讨10-HDA对小脑神经细胞增殖和存活的影响。通过试验确定小脑神经细胞体外培养的最佳条件,阿糖胞苷添加的最佳时间和作用时间。向培养基中添加不同浓度的10-HDA,使其终浓度为0.1μmol/L,0.5μmol/L,1.0μmol/L,5.0μmol/L,10.0μmol/L。通过BrdU、NSE方法检测10-HDA对小脑神经细胞增殖的影响,通过MTT的方法检测10-HDA对小脑神经细胞存活的影响。结果表明:1.无菌条件分离出生48h内的SD大鼠的小脑,剥离脑膜,胰蛋白酶消化,过滤,离心制成单细胞悬液,台盼蓝染色活细胞达到97%以上,小脑神经细胞的最佳接种密度为1×106个/mL,24h后倒置显微镜下观察,细胞贴壁生长,胞体饱满,生长状态良好。通过尼氏染色确定在细胞种植72h后加入阿糖胞苷,作用48h效果最佳,神经元的比例达92%以上。2.BrdU染色结果表明,不同浓度的10-HDA对小脑神经细胞的增殖有一定的影响。细胞增殖率分别为空白对照组(6.8±0.83)%,0.1μmol/L组(9.8±0.84)%,0.5μmol/L组(13.4±0.97)%,1.0μmol/L组(15.2±1.31)%,5.0μmol/L组(9.2±1.30)%,10.0μmol/L组(7.3±0.91)%,0.5μmol/L组和1.0μmol/L组与空白对照组相比有显著性差异(p<0.01)。NSE免疫组化染色表明,0.1μmol/L组的阳性神经元的数量与空白对照组相比有差异(p<0.05)。0.5μmol/L组和1.0μmol/l组的阳性神经元的数量与空白对照组相比有显著性差异(p<0.01)。3.MTT检测结果表明,0.1μmol/L10-HDA组的OD值和空白对照组相比较有差异(p<0.05),0.5μmol/L10-HDA组和1.0μmol/L10-HDA组的OD值和空白对照组相比较有显著性差异(p<0.01),说明这三种浓度的10-HDA均可提高神经细胞活性。5.0μmol/L10-HDA组和10μmol/L10-HDA组与空白对照组相比较无差异。综上所述,在体外培养的小脑神经细胞中添加不同浓度的10-HDA对小脑神经细胞的增殖和存活都有一定的影响,并且和剂量有一定的相关性,适宜浓度的10-HDA可促进小脑神经细胞的增殖和存活。

蜂王浆中10-HDA对新生大鼠小脑神经细胞增殖和存活的影响

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