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Hcy相关酶CBS及CystainC基因多态性与缺血性脑血管病的关系

作　者: 路燕
导　师: 滕军放
学　校: 郑州大学
专　业: 神经病学
关键词: 胱硫醚-β合成酶半胱氨酸蛋白酶抑制因子C 缺血性脑血管病基因多态性基因型血浆同型半胱氨酸
分类号: R743.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

背景缺血性脑血管病(ischemic cerebrovascular diseases, ICVD)是一组突然起病的脑血液循环障碍性疾病,使局部脑组织短暂或持续缺血、缺氧,甚至造成脑组织软化坏死的疾病。临床表现为局灶性神经功能缺失,或伴发意识障碍。它主要包括：1.短暂性脑缺血发作2.动脉血栓性脑梗塞3.栓塞性脑梗塞4.腔隙性脑梗塞四种类型。目前比较明确的病因主要有：血管壁病变(高血压性动脉硬化、动脉粥样硬化),心脏病和血流动力学改变,血液成分和血液流变学改变,及各种类型的栓子,脑血管受压、外伤、痉挛等,而具有高血压病,糖尿病,心脏病,高脂血症及吸烟等卒中危险因素的患者更容易罹患缺血性脑血管病。近年来ICVD的病因及发病机制研究已取得很大进展,高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia,HHcy)也逐渐被认为是ICVD的又一个独立危险因素,而引起Hcy水平升高的主要因素是其代谢相关酶的辅酶维生素的缺乏,其中胱硫醚-β合成酶(cystanthionine-βsynthetase, CBS)(844ins68和G919A基因位点)、N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)(C677T和A1298C基因位点)、蛋氨酸合成酶还原酶(Methionine synthase reductase, MTRR)(A66G基因位点)、蛋氨酸合成酶(Methionine synthase,MS)(D919G基因位点)等代谢酶的研究较多,且发现这些酶的突变位点基因多态性与ICVD的发生存在某种关联,可能成为ICVD的发病机制之一。但是CBS第27796位T-C基因突变位点(CBST27796C)是否也可能导致血浆Hcy水平改变,其多态性与ICVD是否存在关联性,目前类似的研究仍然相对较少。近年来有关半胱氨酸蛋白酶抑制因子(Cystatin C, Cys C)与ICVD的关系也越来越受到人们的重视,Olsson T等在对Cys C基因敲除小鼠模型进行研究时,发现Cys C基因敲除的小鼠发生脑梗死的数量较多,可能是Cys C对蛋白酶抑制剂的作用减弱了,即Cys C可能是脑梗死的一种保护因子。但目前多数研究者认为Cys C可能是ICVD发生的危险因素之一。总所周知,动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)这一慢性炎症过程是ICVD发生的重要危险因素,而有研究发现Cys C的缺失可能是AS的发病机制之一,从而从而间接促进ICVD的发生。也有研究认为Cys C可引起血管壁淀粉样病变的蛋白沉积,考虑Cys C可能与脑梗死发病有关。国外研究也指出Cys C水平升高与缺血性和出血性脑卒中的发生具有直接相关性,Cys C是脑血管事件和死亡风险的预测因子。目前有关Cys C基因Rs2897119(-177C/T)多态性与ICVD发病风险之间是否也存在某种关系,目前国内此类研究仍然较少。本实验拟通过病例-对照研究,用多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)对此两个基因位点基因型分布进行多态性分析,以进一步探讨CBST27796C及Cys C Rs2897119(-177C/T)基因位点与ICVD的关系。目的研究胱硫醚-β合成酶(CBS)基因T27796C与半胱氨酸蛋白酶抑制因子CysC Rs2897119(-177C/T)基因多态性及其与ICVD的相关性。方法1.研究对象：病例组入选人数有185人,男性122例,女性63例,年龄36～86岁,平均61.39岁,所有患者均符合1995年第四届全国脑血管病学术会议修订的急性缺血性脑血管病的诊断标准,其中脑梗塞患者均经头颅CT和(或)MRI检查确诊,包括短暂性脑缺血发作,动脉血栓性脑梗塞,栓塞性脑梗塞,腔隙性脑梗塞患者。对照组入选人数有111人,男性71例,女性40例,年龄32～87岁,平均59.05岁,所有入选人员均为无缺血性脑血管病史,无临床血管事件发生的神经内科其他住院病人及健康体检者。两组中均排除脑出血,蛛网膜下腔出血等出血性脑血管病患者,无帕金森病、痴呆史,无甲状腺疾病,无肝脏及肾脏疾病等,无服用叶酸、维生素B12、美多芭等药物史。2.所有入选研究对象均取早晨空腹肘静脉血3ml,并予2%EDTA-2Na一次性试管中,混匀抗凝,置入-40℃冰箱内保存,准备提取全血基因组DNA。3.采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)方法进行CBST27796C及Cys C Rs2897119基因目的基因片段扩增,扩增片段进行琼脂糖凝胶电泳,结果参照Marker标准判断。4.将PCR产物应用限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)分析方法进行分析,HpaⅡ及SmaⅠ进行酶切,电泳读取检测结果,进行CBS T27796C及Cys C Rs2897119(-177C/T)基因多态性分析和等位基因分型。5.应用SPSS16.0统计软件对数据进行统计分析。病例组和对照组基因型分布经Hardy-Weinberg平衡检验,有群体代表性。CBS T27796C及Cys C Rs2897119(-177C/T)基因型、等位基因数用直接计数法计数,并计算各等位基因频率,组间比较采用x2检验,取α=0.05作为检验水准。结果1.病例组和对照组中血浆总同型半胱氨酸(total homocysteine,tHcy)水平具有显著性差异(t=6.532,P<0.05),显示病例组血浆tHcy水平明显高于对照组。2.病例组和对照组CBS T27796C基因型及等位基因频率分布均具有显著性差异(P<0.05)。3. ICVD的不同类型中CBS T27796C基因型频率及等位基因频率分布不具有显著性差异(P>0.05)。4.病例组和对照组Cys C Rs2897119(-177C/T)基因型频率及等位基因频率分布不具有显著性差异(P>0.05)。结论1.在高同型半胱氨酸血症人群中,ICVD的发生率相应较高,血浆总同型半胱氨酸升高是ICVD发生的一个重要危险因素。2.Hcy代谢相关酶CBS基因突变T27796C及半胱氨酸蛋白酶抑制因子CysC Rs2897119(-177C/T)基因可能普遍存在基因多态性,存在T/T、C/T、C/C三种基因型。3. CBS T27796C基因多态性可能与ICVD有关,一定程度上可改变ICVD的发病风险,所以T27796C位点的基因多态性可能是ICVD的遗传影响因素之一。4. Cys C Rs2897119 (-177C/T)基因位点的基因多态性可能不是ICVD发生的遗传影响因素。

全文目录

摘要  4-8
Abstract  8-15
正文 Hcy相关酶CBS及Cystain C基因多态性与缺血性脑血管病的关系  15-34
  引言  15-18
  材料和方法  18-23
  结果  23-25
  讨论  25-29
  结论  29-30
  附图  30-34
综述一 Hcy代谢相关酶基因多态性与缺血性脑血管病关系的研究进展  34-51
  参考文献  45-51
综述二半胱氨酸蛋白酶抑制因子Cystain C与缺血性脑血管病关系的研究进展  51-55
  参考文献  54-55
致谢  55-56
个人简历在学期间发表的学术论文与研究成果  56

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