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目的：畅肺防哮方是多年来治疗哮喘的经验方,应用于临床,疗效显著,其免疫作用已有初步探索。本课题通过体内实验,研究该方对哮喘大鼠支气管、肺组织形态学的影响,其血液、肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞(EOS)、IgE及嗜酸粒细胞趋化蛋白(Eotaxin)、粘附分子(ICAM-1)表达水平的变化。进一步从细胞和分子水平探讨畅肺防哮方治疗哮喘的作用机理,为开发临床防治哮喘的有效中药复方制剂奠定基础。方法：(1)中药制备将方中麻黄、莱菔子、枳壳提取挥发油,药渣与处方余药同水煎煮三次,过滤浓缩后制成浸膏,按比例加入一定量的挥发油,混均,供实验动物灌胃用。(2)分组与造模6周龄清洁级SD雄性大鼠60只,体重150±20g,随机分为6组,每组10只。A组：空白对照组,B、C、D组分别为畅肺防哮方大、中、小剂量组。E组：西药(地塞米松)组。F组：病理模型组。除A组外,各组大鼠皮下注射1ml含1 mg卵蛋白和200 mg氢氧化铝的生理盐水,同时腹腔注射百日咳杆菌疫苗6×109个作免疫增强剂。A组仅腹腔注射1 ml生理盐水。第15天雾化吸入2%的卵蛋白激发,每日1次,每次30min,连续7天。A组雾化吸入生理盐水。(3)给药各组于第8天开始灌胃给药。B、C、D组分别给予畅肺防哮方大剂量33.84 g生药/kg/d、中剂量16.92 g生药/kg/d、小剂量8.46 g生药/kg/d,E组给予西药地塞米松0.75 mg/kg/d,A、F组给予等量生理盐水。给药容积均为20 ml/kg,连续13天。(4)取材末次引喘24小时后,大鼠麻醉,颈动脉采血3 ml,结扎左肺,支气管插管,右肺进行支气管肺泡灌洗(2 ml,3次),收集灌洗液(BALF)。生理盐水冲洗血管后,多聚甲醛灌注固定。取右中肺,石蜡包埋,切片。(5)检测①取支气管肺泡灌洗液(BALF)0.1 ml,细胞计数板计数,其余BALF 1200 r/min,10min离心,沉淀物涂片,分类计数。上清液-20℃贮存,ELISA法测Eotaxin和ICAM-1含量。②取1滴血涂片,血细胞分类计数。放免法测血中IgE水平。③支气管肺组织切片,常规HE染色,光镜观察,图像分析软件分析其气道重构情况。结果：1.气道局部炎症和肺泡灌洗液、血液中细胞学的变化1.1肺组织病理切片HE染色显示,畅肺防哮方各剂量组及地塞米松组较病理模型组,肺组织嗜酸性粒细胞和炎症细胞浸润明显增少,气道重构的程度明显减轻。1.2肺泡灌洗液中细胞计数显示,畅肺防哮方各剂量组及地塞米松组可使嗜酸性粒细胞计数及百分率明显降低,与病理模型组相比较有显著性差异(P<0.05、P<0.001)。1.3血液细胞计数显示,畅肺防哮方各剂量组及地塞米松组可使嗜酸性粒细胞计数及百分率明显降低,与病理模型组相比较有显著性差异(P<0.01、P<0.001)。2.肺泡灌洗液中嗜酸粒细胞趋化蛋白(Eotaxin)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和外周血中IgE的变化2.1畅肺防哮方各剂量组及地塞米松组可使Eotaxin的含量明显降低,与病理模型组相比较有显著性差异(P<0.01、P<0.001)。2.2畅肺防哮方各剂量组及地塞米松组可使ICAM-1的含量明显降低,与病理模型组相比较有显著性差异(P<0.05、P<0.001)。2.3畅肺防哮方各剂量组及地塞米松组可使IgE的含量明显降低,与病理模型组相比较有显著性差异(P<0.001)。结论：畅肺防哮方通过减轻EOS浸润、减少EOS数量、抑制Eotaxin和ICAM-1表达、降低IgE含量,达到治疗哮喘的作用。
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