学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

缺氧/药物后处理对大鼠心肌细胞ATP敏感性钾通道亚基的影响

作　者: 石金山
导　师: 喻田；刘兴奎
学　校: 遵义医学院
专　业: 心血管麻醉
关键词: 心肌保护后处理 ATP敏感钾通道亚基表达缺血/再灌注损伤
分类号: R541
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 56次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的：建立成年大鼠心室肌细胞分离和培养模型,以成年鼠心肌细胞为观察对象,探讨缺血后处理(Ischemic postconditiong, IPTC)与ATP敏感性钾通道开放剂吡那地尔(pinacidil)药物后处理对成年鼠心室肌细胞ATP敏感钾通道亚基表达的影响。方法：选择16-20周的成年SD大鼠,应用Langendorff离体心脏灌注装置,分离培养心肌细胞。将大鼠心肌细胞随机分为正常组(Nor),对照组(Con),缺血后处理组(IPTC),吡那地尔(Pina)后处理组,格列本脲(glibenclamide,Gly)拮抗IPTC组(Gly+IPTC),格列本脲拮抗吡那地尔组(Gly+Pina)。分离后的心肌细胞培养18小时,除Nor组持续培养外,其余各组均缺氧45min,复氧60min。Con缺氧45min,复氧60min; IPTC组缺氧45min后即刻复氧-缺氧循环3次各3min,继续复氧60min；Pina组缺氧45min后于培养基中加入吡那地尔(100μM)处理5min,再复氧60min；Gly+IPTC组缺氧45min后格列本脲(10μM)处理5min,再行复氧-缺氧后处理,继续复氧60min; Gly+Pina组缺氧45min后格列本脲(10μM)处理5min,再行吡那地尔(100μM)后处理5min,继续复氧60min。心肌细胞经以上不同条件处理后,提取RNA, RT-PCR检测ATP敏感钾通道亚基基因变化情况；其它条件不变,心肌细胞复氧180min后,提取蛋白质,Western-blot检测ATP敏感钾通道亚基蛋白变化情况。结果：1.分离的成年大鼠心肌细胞活性比例约80%-90%,显微镜下观察细胞呈杆状,横纹清晰,有间断不规则的自主收缩。2.ATP敏感钾通道亚基基因表达情况Kir6.1:Con组表达量高于Nor组；IPTC组和Pina组表达明显高于Con组,且IPTC组较Pina组表达量升高；Gly+IPTC组较IPTC组表达量降低,同时Gly+Pina组较Pina组表达量也降低。SUR1:Con组表达量低于Nor组；IPTC组和Pina组表达明显低于Con组,IPTC组较Pina组表达量无明显变化；Gly+IPTC组较IPTC组表达量升高,同时Gly+Pina组较Pina组表达量也升高。Kir6.2与SUR2变化情况与Kir6.1相同。3.ATP敏感钾通道亚基蛋白表达情况Kir6.1:Con组表达量高于Nor组(P<O.05)；IPTC组和Pina组表达明显高于Con组(p<0.05),IPTC组较Pina组表达量明显升高(P<0.05)；Gly+IPTC组较IPTC组表达量降低(p<0.05),同时Gly+Pina组较Pina组表达量也降低(p<0.05)。Kir6.2与SUR2变化情况与Kir6.1相同。SUR1无特异性表达。结论：1.缺氧后处理能显著提高ATP敏感钾通道亚基Kir6.1、Kir6.2和SUR2的表达,能够降低SUR1的mRNA表达,这些效应能被ATP敏感性钾通道拮抗剂抵消。2.ATP敏感性钾通道开放剂后处理也能显著提高ATP敏感钾通道亚基Kir6.1、Kir6.2和SUR2的表达,能够降低SUR1的mRNA表达,这些效应也能被能被ATP敏感性钾通道拮抗剂抵消。3.本实验的结果提示SUR1亚基未参与成年大鼠心室肌细胞ATP敏感性钾通道组成。

全文目录

中英文缩略词  5-6
论文摘要  6-10
  中文摘要  6-8
  英文摘要  8-10
引言  10-12
正文  12-43
  1.材料与方法  12-24
  2.实验结果  24-34
  3.讨论  34-38
  4.结论  38
  5.实验不足之处及下一步研究的工作  38-39
  参考文献  39-43
综述  43-49
  参考文献  47-49
致谢  49-51
附件  51

缺氧/药物后处理对大鼠心肌细胞ATP敏感性钾通道亚基的影响

内容摘要

全文目录

相似论文