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骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞增殖和成骨分化的作用研究

作 者: 黄晓菲
导 师: 杨成
学 校: 华中科技大学
专 业: 口腔临床医学
关键词: 牙髓干细胞 骨碎补总黄酮 PI3K/Akt通路 增殖 成骨分化
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 47次
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内容摘要


目的:探讨骨碎补总黄酮对大鼠牙髓干细胞(DPSCs)增殖成骨分化的影响,并对PI3K/Akt通路在其中的作用进行初步研究。方法:1、分离培养大鼠DPSCs并进行鉴定:采用组织块消化法分离获得大鼠牙髓细胞,克隆化分离培养大鼠DPSCs,并采用免疫组织化学方法鉴定其细胞表型。2、检测骨碎补总黄酮对大鼠DPSCs增殖和成骨分化的作用:实验组用骨碎补总黄酮浓度分别为0.01 g/L、0.05 g/L和0.1 g/L的成骨诱导培养基进行培养,对照组不加入骨碎补总黄酮,仅以成骨诱导培养基为细胞培养体系。分别在诱导培养后第3、5、7和第9天用MTT法检测各组细胞的增殖;培养后第9天检测各组细胞碱性磷酸酶(ALP)水平;第21天茜素红染色法检测钙结节形成情况。3、检测PI3K/Akt通路在骨碎补总黄酮对大鼠DPSCs增殖及成骨分化作用过程中的活化情况:诱导培养后第9天采用Western Blot法检测以上各组细胞pAkt的表达。结果:1、分离出的大鼠牙髓细胞体外生长良好,形态多为成纤维细胞样,少量细胞形态不规则;克隆化分离培养出的DPSCs增殖较快,呈集落样生长,细胞排列紧密,随着培养时间的延长,细胞形态逐渐伸展为长梭型;免疫组化结果显示大鼠DPSCs阳性表达CD44及CD29,而CD34呈阴性表达。2、经骨碎补总黄酮浓度分别为0.01 g/L、0.05 g/L及0.1 g/L的诱导培养基作用后,从时间上看,在各检测时间点,各实验组OD490与对照组相比均增加(P<0.05),且0.05 g/L组较0.01 g/L组的OD490也增加(P<0.05),但0.1 g/L组较0.05 g/L组OD490增加没有显著性差异(P﹥0.05);从浓度上看,各实验组第5、7、9天较第3天的OD490均增加(P<0.05),且各实验组OD490时间依赖性增加也有显著性(P<0.05)。各实验组细胞ALP活性均高于对照组(P<0.05),且在骨碎补总黄酮浓度为0.01 g/L、0.05 g/L及0.1 g/L时的OD410浓度依赖性增高也有显著性(P<0.05);实验组钙化能力较对照组增强(P<0.05),且有浓度依赖性(P<0.05)。3、pAkt的蛋白相对表达量随骨碎补总黄酮浓度的增加而升高(P<0.05)。结论:骨碎补总黄酮对大鼠DPSCs增殖及成骨分化具有促进作用,表现出浓度和时间依赖性,且该作用可能是依赖PI3K/Akt通路所介导的。

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