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慢病毒载体介导人TNF-β基因对结直肠癌细胞的作用

作　者: 李传智
导　师: 王海波
学　校: 青岛大学
专　业: 外科学
关键词: 结直肠癌细胞 TNF-β 慢病毒载体荧光定量RT-PCR
分类号: R735.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 34次
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内容摘要

目的探讨慢病毒载体介导人TNF-β基因对结直肠癌细胞HCT116作用的研究方法：培养HCT116细胞系,通过慢病毒载体介导TNF-β基因的感染,将细胞分为感染慢病毒载体介导TNF-β基因细胞组(实验组),无TNF-β基因的慢病毒细胞组(阴性对照组),HCT116细胞(空白对照组)。采用实时荧光定量RT-PCR检测感染后TNF-β基因mRNA水平表达情况,通过MTT实验,检测三组细胞生长活性。结果：通过在荧光显微镜下观察HCT116细胞内绿色荧光蛋白的表达发现慢病毒感染细胞后48h,细胞的感染效率大于95%,慢病毒对HCT116细胞的感染效率非常高。实时荧光定量RT-PCR实验所得数据分析显示慢病毒载体介导的TNF-β基因感染HCT116细胞后TNF-βmRNA的表达在12h、24h、48h、72h和5d均明显高于阴性对照组和空白对照组,且差异均有统计学意义(P均<0.05),而阴性对照组和空白对照组之间差别无统计学意义(P>0.05)。在MTT实验中,从第1天起,实验组细胞生长就受到抑制,与其他组出现差异(P<0.05),而阴性对照组和空白对照组差别无统计学意义(P>0.05)。从第2天开始,阴性对照组与空白对照组比较也出现生长减慢,并且差别均有统计学意义(P<0.05),提示通过TNF-β感染后,细胞生长明显减慢。结论：慢病毒介导人的TNF-β基因对结直肠癌细胞HCT116有明显抑制作用。这为基因治疗结直肠癌提供了新的理论途径。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-5
引言  5-7
第一章实验材料与方法  7-17
  1.1 主要试剂仪器及来源  7-8
    1.1.1 试剂  7
    1.1.2 仪器  7
    1.1.3 耗材  7-8
    1.1.4 溶液的配置  8
  1.2 实验方法  8-17
    1.2.1 细胞培养  8-10
    1.2.2 慢病毒对结直肠癌细胞HCT116的感染  10-12
    1.2.3 实时荧光定量PCR实验  12-15
    1.2.4 MTT实验  15-17
第二章实验结果  17-32
  2.1 细胞培养  17
  2.2 病毒感染  17-19
  2.3 测定OD值结果  19-20
  2.4 PCR扩增产物凝胶电泳  20-21
  2.5 实时荧光定量PCR实验结果  21
  2.6 TNF-β、GAPDH表达PCR反应荧光强度扩增曲线及融解曲线  21-23
  2.7 结直肠癌细胞HCT116中各对照组TNF-βmRNA表达量  23-25
  2.8 MTT实验  25-32
第三章讨论  32-34
第四章结论  34-35
参考文献  35-36
综述  36-46
综述的参考文献  46-50
攻读学位期间的研究成果  50-51
致谢  51-53

慢病毒载体介导人TNF-β基因对结直肠癌细胞的作用

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