学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

磷脂酶D3对胰岛素（PI3K-Akt-GLUT4）传导通路的调控研究

作　者: 张军林
导　师: 王华岩
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 磷脂酶D3 Akt 胰岛素 C2C12细胞
分类号: Q504
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 37次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


磷脂酶D(PLD)催化卵磷脂(phosphatidylcholine, PC)水解产生胆碱(choline)和磷脂酸(phosphatidic acid, PA),其代谢产物参与调控细胞内许多生理和生化过程。在超表达磷脂酶D3 (PLD3)的成肌细胞(C2C12细胞)中,研究了PLD3对胰岛素刺激后Akt激活的影响,并希望能为磷脂酶D3在胰岛素传导通路中调控作用的进一步研究提供参考。试验结果如下:1.通过PCR扩增目的基因PLD3,使用pcDNA3Flag构建成了带有G418抗性并与Flag标签蛋白的真核表达载体pPLD3。然后将构建好的载体用脂质体转入C2C12成肌细胞,用含有一定浓度的G418筛选培养基筛选PLD3超表达细胞株。最后用RT-PCR和免疫印迹杂交技术检测PLD3在G418抗性的细胞中的表达情况,得到2个PLD3超表达细胞株,2个PLD3弱表达细胞株,和1个空载体转染细胞株。2.对PLD3表达细胞株的观察和计数绘制生长曲线发现,PLD3表达细胞株和C2C12细胞在形态上没有明显差别,但是PLD3的额外表达却给细胞造成了生长的负担,使细胞周期明显延长,。这说明,PLD3的表达没有对细胞毒害作用,只是增加了细胞代谢上的负担。3.研究胰岛素刺激下,PLD3的超表达对Akt激活的影响。结果表明,PLD3超表达细胞的Akt磷酸化水平比对照组低,并且不受胰岛素浓度变化的调控。虽然PLD3超表达细胞中Akt磷酸化水平随胰岛素刺激时间的延长而有所增加,但磷酸化总水平比对照组低。磷脂酶D抑制剂丁-1醇能够抑制对照组胰岛素刺激下Akt磷酸化,却不能抑制PLD3超表达细胞的Akt磷酸化,并且PLD3超表达细胞Akt磷酸化水平比对照组高6倍。用磷脂酸(PA)做刺激时,对照组的Akt磷酸化明显增加,而PLD3超表达细胞株的Akt磷酸化没有显著变化;用PA和胰岛素同时刺激时,PLD3超表达株和对照组的Akt磷酸化均比PA单独刺激时降低。这说明PLD3的超表达抑制成肌细胞内胰岛素信号的传导。

全文目录


摘要  5-6
ABSTRACT  6-11
第一章 磷脂酶D 研究概况  11-17
  1.1 引言  11
  1.2 磷脂酶D 家族的分子生物学特点  11-12
    1.2.1 哺乳动物磷脂酶D 家族基因的克隆  11-12
    1.2.2 哺乳动物磷脂酶D 家族的特点  12
  1.3 磷脂酶D 的分布  12-13
    1.3.1 磷脂酶D 的表达分布  12-13
    1.3.2 磷脂酶D 的亚细胞分布  13
  1.4 磷脂酶D 的结构域和功能  13-15
    1.4.1 HKD 催化功能域  13-14
    1.4.2 PH 结构域  14
    1.4.3 PX 结构域  14
    1.4.4 Loop 结构域  14-15
  1.5 磷脂酶D 生化研究  15-16
    1.5.1 生化研究概况  15
    1.5.2 磷脂酶D 催化反应机理  15-16
    1.5.3 反应底物的种类  16
  1.6 小结  16-17
第二章 磷脂酶D 及其产物磷脂酸的调控与功能的研究  17-27
  2.1 引言  17
  2.2 PLD 参与的信号通路  17-20
    2.2.1 磷脂酶D 与Raf 信号通路  17-18
    2.2.2 磷脂酶D 参与PI3K-Akt-GLUT4 通路的活化  18-19
    2.2.3 磷脂酶D 直接活化mTOR 通路  19-20
  2.3 磷脂酶D 在细胞内的激活调控  20-21
    2.3.1 磷酸肌醇  20
    2.3.2 蛋白质激酶C（PKC）和蛋白质磷酸化  20-21
    2.3.3 ADP 核糖基化因子（ARF）  21
    2.3.4 Rho GTP 酶  21
  2.4 磷脂酶D 代谢产物磷脂酸  21-25
    2.4.1 磷脂酸的结构  21
    2.4.2 磷脂酸的转化和衍生  21
    2.4.3 磷脂酸的功能  21-25
  2.5 结论和展望  25-27
第三章 磷脂酶D3 超表达细胞系的建立  27-41
  3.1 材料与方法  27-36
    3.1.1 试验材料  27-29
    3.1.2 试验方法  29-36
  3.2 结果  36-39
    3.2.1 PCR 扩增得到PLD3  36-37
    3.2.2 PLD3 与pMT-18 连接  37
    3.2.3 PLD3 真核表达载体pPLD3 构建与鉴定  37-38
    3.2.4 PLD3 超表达细胞的筛选和检测  38-39
  3.3 讨论  39-40
    3.3.1 表达载体构建  39-40
    3.3.2 稳定表达细胞系的筛选  40
  3.4 小结  40-41
第四章 磷脂酶D3 稳定表达细胞系的细胞生物学特点  41-46
  4.1 材料与方法  41-43
    4.1.1 试验材料  41-42
    4.1.2 试验方法  42-43
  4.2 结果  43
    4.2.1 细胞形态  43
    4.2.2 生长曲线和倍增时间  43
  4.3 讨论  43-45
    4.3.1 细胞形态的变化  43-45
    4.3.2 生长曲线和倍增时间的测定  45
  4.4 小结  45-46
第五章 胰岛素刺激下磷脂酶D3 对AKT 信号通路的影响  46-57
  5.1 材料与方法  46-50
    5.1.1 试验材料  46-47
    5.1.2 试验方法  47-50
  5.2 结果  50-55
    5.2.1 PLD3 抑制胰岛素刺激下Akt 的磷酸化  50-52
    5.2.2 PLD 抑制剂丁-1-醇对Akt 磷酸化的影响  52
    5.2.3 磷脂酸PA 对Akt 的磷酸化的影响  52-55
  5.3 讨论  55-56
    5.3.1 PLD 家族不同成员的功能  55
    5.3.2 PA 的转化和衍生  55-56
  5.4 小结  56-57
结论  57
进一步研究的课题  57-58
参考文献  58-64
英文缩略词表  64-65
致谢  65-66
作者简介  66

相似论文

  1. 内皮素-1、胰岛素抵抗与急性缺血性脑血管病的相关性研究,R743.3
  2. miRNA-23a在C2C12细胞成肌分化过程中的调节作用研究,Q952.5
  3. 每日一次双相门冬胰岛素30治疗糖尿病的疗效和安全性研究,R587.1
  4. HIF-1α在犬体外循环缺血再灌注心肌胰岛素抵抗中的表达及意义,R654.1
  5. 牛膝总皂甙对兔早期骨关节炎及PI3K/AKT通路的影响,R285.5
  6. 胰岛素样生长因子-1与高血压心血管重构的相关性研究,R544.1
  7. 2型糖尿病胰岛素治疗的优化方案及其相关因素分析,R587.1
  8. 地特胰岛素治疗2型糖尿病的临床疗效及安全性,R587.1
  9. 胰岛素泵及降糖药对糖尿病的疗效对比分析,R587.1
  10. 2型糖尿病患者胰岛素泵治疗的剂量及相关因素分析,R587.1
  11. 影响粒单细胞系HL-60细胞功能的血糖水平的探讨,R587.1
  12. CEF/TE方案新辅助化疗与乳腺癌MAPK/PI3K通路及Ki67关系的研究,R737.9
  13. PI3K/AKT与凋亡相关调控因子在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其关系,R737.31
  14. 血清C肽、皮质醇、胰岛素与早产儿低血糖的研究,R722.6
  15. bFGF对鼠脑缺血/再灌注皮质区p-Akt（Ser473）、Fractalkine表达的影响,R743.3
  16. 大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛病理变化与细胞凋亡相关因子AKT、JNK的表达研究,R743.34
  17. OGP和IGF-Ⅰ对人牙周膜细胞生物学功能的影响,R781.4
  18. 三味药食同源中药对代谢综合征大鼠糖脂代谢及抗氧化的影响,R285.5
  19. 住院2型糖尿病患者胰岛素应用剂量相关因素分析,R587.1
  20. 应用胰岛素治疗的2型糖尿病患者血糖控制水平及其影响因素分析,R587.1
  21. 糖尿病大鼠认知功能损害和GFAP表达变化及胰岛素干预影响,R749.2

中图分类: > 生物科学 > 生物化学 > 一般性问题 > 生化效应
© 2012 www.xueweilunwen.com