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内皮祖细胞在构建血管化组织工程骨中应用的实验研究

作 者: 高振华
导 师: 李宁毅
学 校: 青岛大学
专 业: 口腔临床医学
关键词: 内皮祖细胞 细胞培养 鉴定 组织工程骨
分类号: R782
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 22次
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内容摘要


目的:分离、培养和鉴定犬骨髓来源的血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs),并观察其在实验犬体内构建组织工程骨时对其血管化和成骨能力的影响。方法:抽取实验犬骨髓,密度梯度离心法获取单个核细胞,通过不同培养方法获得EPCs和经成骨诱导的骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs),对EPCs进行观察并采用乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)、荆豆凝集素(FITC-UEA-I)荧光双标、流式细胞仪鉴定;制备犬同种异体脱钙骨基质(demineralized bone matrix, DBM),于体外复合EPCs和经成骨诱导的BMSCs,将复合体植入实验犬背阔肌筋膜下,影像学和组织学方法观察术后不同时间点组织工程骨的血管化和骨形成程度。所得数据采用SPSS13.0软件包进行配对t检验。结果:EPCs原代呈集落生长,培养至12天细胞出现“血管样”生长并由长梭形变为典型的“铺路石”样,Dil-ac-LD、FITC-UEA-I荧光双染色呈阳性、流式细胞术示细胞CD34和CD133呈阳性。动物实验术后4、8、12周,X线显示实验侧的骨密度值明显高于对照侧,两组标本之间骨密度值之间差异有统计学差异(P<0.05);组织学观察显示实验侧成骨和血管化均多于对照侧,两组新生骨面积及血管面积之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:采用密度梯度离心与贴壁培养法分离、培养的犬骨髓来源的单个核细胞并在特定培养条件下可获取EPCs,EPCs应用于组织工程骨时可以促进其血管化和成骨能力,加速新生骨形成。

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中图分类: > 医药、卫生 > 口腔科学 > 口腔颌面部外科学
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