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烟草浸提液对大鼠牙龈成纤维细胞在钛板上附着的影响

作　者: 石玲波
导　师: 侯玉东
学　校: 滨州医学院
专　业: 口腔临床医学
关键词: 钛大鼠牙龈成纤维细胞附着增殖形态
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的：本研究观测烟草浸提液(smokeless tobacco extract, ST)对大鼠牙龈成纤维细胞(Rat Gingival Fibroblasts, RGFs)在钛板上附着数目、形态、增殖的影响,从细胞水平探讨烟草对种植体龈界面破坏的理论机制。方法：实验1、采用组织块法进行RGFs的原代培养,倒置相差显微镜下观察细胞生长状态。取第3代RGFs进行波形丝蛋白(cytokeratin, CK)和角蛋白(vimentin,V)染色以鉴定细胞来源,用血球计数板计数法记录细胞的生长曲线。实验2、将厚度lmm、直径10mm的钛板用金相砂纸逐级打磨。体式解剖显微镜观测钛板表面形态,表面粗糙度测量仪测量钛板表面粗糙度,以Ra值定义粗糙度。实验3、将消毒备用的钛板置于24孔板中,加入含0、0.8、1.6、3.2、6.24、12.5、25、50g／L ST的10%胎牛血清DMEM细胞悬浮液。孵育2小时后,MTT法测钛板表面贴附细胞数；孵育24小时后,荧光倒置显微镜、激光扫描共聚焦显微镜观察拍片,病理图象分析系统分析钛板表面细胞形态、铺展的变化。取浓度为5×107/L细胞悬浮液接种于预先放置在24孔板内的钛板表面,孵育24小时后更换含各种浓度的0、0.8、1.6、3.2、6.24、12.5、25、50g／L ST培养液常规培养,在第5天行MTT法测细胞增殖率。结果：1、RGFs最早在第3-7天从组织块中爬出,大多呈梭形。一般2到3周长满瓶底,可进行传代。SP免疫组化染色结果显示RGFs波形丝蛋白染色为阳性,角蛋白染色为阴性,提示该细胞来源于中胚层,非上皮来源的细胞。生长曲线略呈“S”形,接种后第1天细胞数略有下降,随后生长逐渐加快,这种状态持续至第5天。第6天开始进入平台期,细胞生长速度减缓。2、打磨后的钛板表面呈现有规则的沟嵴相间的表面形貌。表面粗糙度测量Ra值为0.11±0.0047μm。3、MTT法测2小时钛板表面粘附细胞数表明,ST可抑制大鼠牙龈成纤维细胞在钛板表面的贴附,且抑制作用随着ST浓度的增加而增强。控制组(0g／L ST)与0.8、1.6、3.2、6.24、12.5、25、50g／L ST组比较时,统计分析差异有显著性(p<0.05)。免疫荧光检测分析,未加ST的细胞呈现饱满的纺垂形；加ST组,随着ST浓度的升高,细胞收缩明显,体积变小,排列逐渐紊乱,细胞呈圆形或椭圆形,细胞两端突起变细,胞质减少、稀疏。RGFs贴附在钛板表面为扁平的纺锤形,沿着划痕的方向伸展。ST可抑制RGFs在钛板表面的伸展,随着ST浓度的增加细胞伸展面积逐渐减小,逐渐变为圆形。MTT法测第5天细胞在钛板表面的增殖表明,ST可抑制RGFs在钛板表面的增殖,且抑制的强弱与剂量相关。结论：1、大鼠牙龈成纤维细胞组织块培养法获得的组织块量大,可培养出足够的细胞,选用3～5代细胞进行实验,细胞活性强,性状稳定。2、经过打磨后的钛板,其表面粗糙度在种植体基桩表面粗糙度范围内,符合临床种植体颈部生物学封闭的要求。3、大鼠牙龈成纤维细胞在钛板表面贴附、增殖的能力可被ST抑制,且与剂量呈正相关。

全文目录

中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
引言  9-16
第一部分大鼠牙龈成纤维细胞的分离培养和鉴定  16-23
  材料和方法  16-19
  结果  19-20
  讨论  20-22
  结论  22
  参考文献  22-23
第二部分实验用钛板的准备及检测  23-29
  材料和方法  23-25
  结果  25-26
  讨论  26-27
  结论  27-28
  参考文献  28-29
第三部分烟草浸提液对大鼠牙龈成纤维细胞在钛板表面附着的影响  29-44
  材料和方法  29-33
  结果  33-38
  讨论  38-42
  结论  42
  参考文献  42-44
全文总结  44-45
附图  45-56
致谢  56-57
文献综述  57-63
已发表论文  63-67

烟草浸提液对大鼠牙龈成纤维细胞在钛板上附着的影响

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