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锁核酸修饰的电化学DNA生物传感器用于检测急性早幼粒细胞白血病相关融合基因的实验研究

作　者: 孙洲亮
导　师: 林新华
学　校: 福建医科大学
专　业: 药物分析学
关键词: 锁核酸电化学DNA生物传感器急性早幼粒白血病混合样品
分类号: R733.71
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 41次
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内容摘要

因快速、灵敏、微型化和易于操作等优点受到了广泛关注的新型生物传感器——电化学DNA生物传感器,被认为是开辟电化学与分子生物学的交叉学科,对遗传工程、医药学的研究具有深远的意义和应用价值。锁核酸探针是近年来随着基因工程技术发展起来的一种新探针技术,具有较强的DNA、RNA识别能力和亲和力、较高的热稳定性等特点,已应用于基因研究的各个领域以及疾病的诊断和治疗中。本研究首次设计出一种新型的电化学探针(锁核酸),进而构建了一种“三明治”模式的电化学DNA传感器,用于检测急性早幼粒白血病APL的PML/RARα融合基因,并考察了传感器的特异性、稳定性等性能:一、将锁核酸探针技术与电化学酶联免疫分析技术相结合构建了锁核酸修饰的“三明治”模式电化学DNA生物传感器对目的基因进行检测,以杂交前后电流的变化作为指示信号。结果表明:在优化杂交条件下,该传感器可在1.0×10 -13～1.0×10 -11 mol/L DNA浓度范围内定量测定人工合成的PML/RARα融合基因,且互补链浓度与该传感器的检测电流信号成良好的线性关系,检测限为7.4×10-14 mol/L。对杂交溶液中的完全互补序列与不同错配序列能较好区分,对单纯杂交体系中人工合成的PML/RARα融合基因定性定量测定结果较为理想。二、将不同种类的错配序列混合作为干扰背景,对“三明治”模式电化学DNA生物传感器的特异性和灵敏度进行进一步的考察。结果表明,在最佳条件下,该电化学DNA生物传感器测定混合干扰体系中人工合成的PML/RARα融合基因的浓度线性范围为5.0×10 -9～5.0×10 -11 mol/L,检测限为9.6×10-12 mol/L。由此可见,该传感器在一定干扰条件下仍具有较强的分子识别能力,能较好的与杂交溶液中的完全互补序列进行杂交,为临床急性早幼粒细胞白血病实际样品的检测研究奠定了基础。

全文目录

英文缩写字表  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-12
正文  12-47
  第一部分锁核酸探针修饰的“三明治”模式电化学DNA 生物传感器检测急性早幼粒细胞白血病特异基因的实验研究  12-36
    1.1 仪器与试剂  14-18
    1.2 实验方法  18-21
    1.3 结果与讨论  21-36
  第二部分锁核酸探针修饰的“三明治”模式电化学DNA 生物传感器检测混合模拟样品的初步实验研究  36-47
    2.1 仪器与试剂  36
    2.2 实验方法  36-38
    2.3 结果与讨论  38-47
参考文献  47-53
结论  53-55
致谢  55-56
综述  56-72

锁核酸修饰的电化学DNA生物传感器用于检测急性早幼粒细胞白血病相关融合基因的实验研究

内容摘要

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