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Tim-3分子在非小细胞肺癌浸润淋巴细胞上的表达及其生物学功能的初步研究

作　者: 高鑫
导　师: 卢斌峰；张学光
学　校: 苏州大学
专　业: 免疫学
关键词: Tim-3 NSCLC 真核表达基因转染
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 91次
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内容摘要

2002年发现的Tim-3分子是T细胞免疫球蛋白粘蛋白(Tim)家族的成员,被证实为表达于Th1细胞而不表达于Th2细胞的一个免疫分子。由301个氨基酸组成,属于Ⅰ型膜蛋白,结构上包括一个Ig样V区的N-端(富含半胱氨酸),一个富含丝氨酸和苏氨酸的粘蛋白区,一个跨膜区,以及一段胞内区。其中胞内区末端具有使酪氨酸磷酸化的结构,与跨膜信号的转导有关。随着进一步的研究,发现其对Th1细胞具有负向调控作用,并且在Th17上也发现了这一分子的表达,但表达要低于Th1细胞。进而还发现,Tim-3在自身免疫性疾病、炎症、免疫耐受和肿瘤免疫中也发挥着重要作用。现在,对于Tim-3确切的生物学意义及在相关疾病中的作用尚待进一步探讨。这不仅具有理论研究意义,还具有潜在的临床应用价值。本论文分为两个部分:1. Tim-3分子在非小细胞肺癌浸润淋巴细胞上的表达将非小细胞肺癌(non small cell lung cancer ,NSCLC)病人手术切除的癌组织及癌旁组织用Ⅳ型胶原酶消化加机械研磨的方法获取单细胞悬液,再用淋巴细胞分离液分离肿瘤浸润淋巴细胞,用相应单克隆抗体染色并用流式细胞仪检测Tim-3在肿瘤浸润T细胞上的表达。同时,对患者和正常人的外周血中的T细胞也进行检测。实验结果发现,Tim-3高表达于NSCLC组织,且明显高于癌旁组织,而在患者外周血及健康人外周血中不表达。2.人Tim-3基因的克隆、转基因细胞的构建及其生物学功能的初步研究从人外周血中分离出T细胞,将其在体外用PHA活化,48h后,收集细胞,抽提总RNA,采用RT-PCR的方法,把总RNA中的mRNA逆转录成cDNA并大量扩增目的基因。将目的基因装入pIRES2-EGFP真核表达载体中并测序鉴定。用脂质体转染技术将测序正确的重组真核表达载体转染入L929细胞,72h后,用G418筛选并最终获得了稳定表达Tim-3蛋白的L929基因转染细胞。从人外周血中分离出T细胞并体外活化,以适当数量接种于96孔板,与Tim-3转基因细胞共培养。于24h、48h、72h用MTT法测细胞增殖,并且收集细胞培养上清,ELISA检测细胞因子IL-2和IFN-r的分泌。发现,阻断Tim-3信号通路促使T细胞在体外的增殖,分泌细胞因子的增加。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
研究背景  9-16
  1. Tim-3 的发现及结构特征  10
  2. Tim-3的表达  10
  3. Tim-3的配体  10-11
  4. Tim-3的生物学功能  11-13
  参考文献  13-16
第一部分 Tim-3 分子在NSCLC 浸润淋巴细胞上的表达及其临床意义  16-26
  材料与方法  17-18
  结果  18-22
  讨论  22-23
  参考文献  23-26
第二部分人Tim-3 基因克隆、基因转染细胞株的构建及其生物学功能的初步研究  26-38
  材料与方法  26-36
  讨论  36
  参考文献  36-38
小结与展望  38-39
综述  39-47
课题资助  47-48
硕士期间撰写和发表的论文  48-49
缩略词表  49-51
致谢  51-52

Tim-3分子在非小细胞肺癌浸润淋巴细胞上的表达及其生物学功能的初步研究

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