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新型聚乙二醇胰岛素的体内过程和安全性研究

作　者: 李春雨
导　师: 孟宪丽
学　校: 成都中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 药代动力学 药效动力学 毒代动力学 毒效动力学 聚乙二醇胰岛索 放射免疫分析法 酶联免疫分析法
分类号: R969.1
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


目的聚乙二醇(PEG)修饰技术是现今国际上蛋白药物二次开发的热点技术。本项目研究重组人胰岛素(Det)的PEG修饰物新型聚乙二醇胰岛素(PEG-Det)的体内代谢过程及安全性,以期阐明PEG修饰技术使蛋白药物发挥长效作用及具有良好安全性的合理性和科学性。方法本研究基于生物技术药物的特点,建立并采用放射免疫(RIA)和酶联免疫(ELISA)的分析方法,研究Det/PEG-Det的Beagle犬药代动力学/药效动力学特征,研究PEG修饰对Det体内过程的影响；研究PEG-Det的Beagle犬毒代动力学/毒效动力学特征、免疫原性、免疫毒性、制剂安全性,综合评价PEG修饰对Det安全性的影响。结果(1)药物体内过程研究结果表明：①与非PEG修饰的Det相比,PEG-Det在Beagle犬体内平均消除半衰期t1/2β延长59倍；清除率CL降低35倍；达峰时间Tmax增加9倍。②Beagle犬单次皮下注射(s.c.) PEG-Det(25、50和100μg/kg)后,峰浓度Cmax和药时曲线下面积AUC、Tmax随剂量增加呈更大比例增大,CL随剂量增大而降低：t1/2β与剂量呈非相关。③Beagle犬多次s.c.PEG-Det (50μg/kg)后，体内无蓄积。④Beagle犬多次s.c. PEG-Det(37.5、75和150μg/kg)在毒性剂量暴露下,血药浓度升高的同时伴随着血糖的降低,随着血药浓度的降低,血糖水平也逐渐升高,药后12h基本恢复到给药前的血糖基础水平,Cmax和AUC随剂量的增加而增大,体内无蓄积。(2)药物安全性研究结果表明：①Beagle犬血清中抗PEG-Det抗体为PEG修饰剂中单甲氧基结构产生,与Det蛋白无关；②PEG-Det对免疫系统补体C3、C4及免疫复合物CIC水平无明显影响,对白细胞总数及分类计数、免疫组织器官未产生明显毒性：③PEG-Det s.c或静脉注射(i.v.)给药时,对注射部位皮肤及肌肉或血管均无刺激反应：④豚鼠全身主动过敏试验和大鼠被动过敏试验结果均呈阴性；⑤体外溶血试验结果呈阴性。结论PEG修饰确实能改善和提高Det的PK/PD特性,延长半衰期,降低清除率,增加暴露量,减小血清峰-谷浓度比率,延缓药物体内作用时间,具有长效作用及良好的安全性。

全文目录


中文摘要  2-4
ABSTRACT  4-11
英文缩略词表  11-12
前言  12-19
  1. 糖尿病的流行病学  12
  2. 胰岛素及其类似物的研究及临床应用现状  12-14
  3. 蛋白及多肽类药物聚乙二醇修饰研究概述  14-16
  4. 研究目的和意义  16-17
  5. 研究思路  17-19
第一章 Det Beagle犬PK/PD研究  19-31
  1. 试验材料  19-20
    1.1 实验药物  19
    1.2 ~(125)I胰岛素放射免疫试剂药盒  19
    1.3 血糖检测试纸  19
    1.4 主要仪器  19-20
    1.5 实验动物  20
  2. 试验设计  20-22
    2.1 给药剂量与方法  20
    2.2 试验分组及给药  20
    2.3 血浆样品采集与存放  20
    2.4 Beagle犬血糖水平测定方法及原理  20-21
    2.5 RIA法测定血浆中胰岛素浓度  21
    2.6 方法学研究  21-22
    2.7 药代/药效动力学数据处理及药代参数计算  22
  3. 试验结果  22-28
    3.1 血糖测定结果  22-23
    3.2 标准曲线、标准曲线控制参数和最低定量限  23-24
    3.3 精密度和准确度  24-25
    3.4 稳定性试验  25
    3.5 稀释度试验  25-26
    3.6 特异性试验  26
    3.7 Beagle犬血浆中胰岛素浓度测定  26-28
    3.8 药代动力学参数的计算和分析  28
  4. 讨论  28-30
  5. 结论  30-31
第二章 PEG-Det Beagle犬PK/PD研究  31-50
  1. 试验材料  31-32
    1.1 实验药物  31
    1.2 实验溶媒  31
    1.3 ~(125)I胰岛素放射免疫试剂药盒  31-32
    1.4 血糖检测试纸  32
    1.5 主要仪器  32
    1.6 试验动物  32
  2. 试验设计  32-35
    2.1 PEG-Det Beagle犬单次给药药代动力学研究试验设计  32-33
    2.2 PEG-Det Beagle犬多次给药药代动力学研究试验设计  33-34
    2.3 Beagle犬血糖水平测定方法及原理  34
    2.4 RIA法测定血浆中胰岛素浓度  34
    2.5 方法学研究  34
    2.6 药效/药代动力学数据处理及药代参数计算  34-35
  3. 试验结果  35-47
    3.1 血糖测定结果  35-38
    3.2 标准曲线、标准曲线控制参数和最低定量限  38-39
    3.3 精密度和准确度  39-40
    3.4 稳定性试验  40
    3.5 稀释度试验  40-41
    3.6 Beagle犬血浆中胰岛素浓度测定  41-45
    3.7 药代动力学(PK)参数的计算和分析  45-47
  4. 讨论  47-49
  5. 结论  49-50
第三章 PEG-Det Beagle犬毒代动力学研究  50-74
  1. 试验材料  50-52
    1.1 实验药物  50
    1.2 实验溶媒  50
    1.3 ~(125)I胰岛素放射免疫试剂药盒  50
    1.4 血糖检测试纸  50-51
    1.5 主要仪器  51
    1.6 试验动物  51-52
  2. 试验设计  52-56
    2.1 组别设置  52
    2.2 给药剂量及浓度  52
    2.3 给药途径及选择理由  52-53
    2.4 给药周期、给药频率  53
    2.5 停药恢复期  53
    2.6 试验动物分组与剖杀  53-54
    2.7 药物配制  54
    2.8 给药方法  54
    2.9 血样采集  54-55
    2.10 Beagle犬血糖水平测定方法及原理  55
    2.11 RIA法测定血浆中胰岛素浓度  55
    2.12 方法学研究  55
    2.13 毒效/毒代动力学数据处理及药代参数计算  55-56
  3. 试验结果  56-71
    3.1 血糖测定结果  56-58
    3.2 标准曲线、标准曲线控制参数和最低定量限  58-59
    3.3 精密度和准确度  59-60
    3.4 稳定性试验  60
    3.5 稀释度试验  60-61
    3.6 特异性试验  61
    3.7 Beagle犬血浆中胰岛素浓度测定  61-64
    3.8 毒代动力学(TK)参数的计算和分析  64-71
  4. 讨论  71-72
  5. 结论  72-74
第四章 PEG-Det Beagle犬免疫原性研究  74-99
  1. 材料与方法  74-76
    1.1 主要试剂  74-75
    1.2 主要试验仪器  75
    1.3 试验设计  75
    1.4 间接ELISA法测定血清抗PEG-Det/Det结合抗体  75-76
    1.5 结合抗体阳性结果判断标准及统计学处理  76
  2. 试验结果  76-90
    2.1 间接ELISA法测定血清抗PEG-Det结合抗体方法学研究  76-82
    2.2 间接ELISA法测定血清抗Det结合抗体检测方法学研究  82-88
    2.3 间接ELISA法检测抗PEG-Det抗体的结合抗体  88-89
    2.4 间接ELISA法检测抗Det抗体的结合抗体  89-90
  3. 讨论  90
  4. 血清中抗PEG-Det抗体特异性验证  90-96
    4.1 血清中抗PEG-Det抗体特异性验证一  90-92
    4.2 血清中抗PEG-Det抗体特异性验证二  92-93
    4.3 血清中抗PEG-Det抗体特异性验证三  93-96
  5. 讨论  96-98
  6. 结论  98-99
第五章 PEG-Det免疫毒性研究  99-114
  1. 材料与方法  99-102
    1.1 酶联免疫分析(ELISA)试剂盒  99
    1.2 主要试验仪器  99
    1.3 试验设计  99-102
    1.4 数据处理  102
    1.5 数据统计  102
  2 试验结果  102-106
    2.1 犬血清C3浓度测定结果  102-104
    2.2 犬血清C4浓度测定结果  104-105
    2.3 犬血清CIC浓度测定结果  105-106
  3 讨论与结论  106-114
第六章 PEG-Det制剂安全性研究  114-132
  1. PEG-Det皮下注射给药部位刺激试验  114-118
    1.1 试验材料  114-115
    1.2 动物处置  115
    1.3 试验设计  115-117
    1.4 试验结果  117
    1.5 试验结论  117-118
  2. PEG-Det血管刺激试验  118-120
    2.1 试验材料  118
    2.2 动物处置  118
    2.3 试验设计  118-119
    2.4 试验结果  119
    2.5 试验结论  119-120
  3. PEG-Det全身主动过敏试验  120-124
    3.1 试验材料  120-121
    3.2 动物处置  121
    3.3 试验设计  121-123
    3.4 试验结果  123-124
    3.5 试验结论  124
  4. PEG-Det皮肤被动过敏试验  124-127
    4.1 试验材料  124-125
    4.2 动物处置  125
    4.3 试验设计  125-127
    4.4 试验结果  127
    4.5 试验结论  127
  5. PEG-Det溶血性试验  127-132
    5.1 试验材料  127-128
    5.2 试验设计  128-129
    5.3 试验结果  129-131
    5.4 试验结论  131-132
结论  132-134
创新点  134-135
问题与展望  135-137
参考文献  137-141
致谢  141-142
在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果  142-143

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学 > 临床药理学 > 药物代谢动力学
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