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Sunitinib对EGF诱导的HaCaT细胞增殖与凋亡的影响及作用机制

作　者: 刘颖科
导　师: 陈翔
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: 受体酪氨酸激酶抑制剂 sunitinib HaCaT细胞增殖凋亡
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：研究受体酪氨酸激酶抑制剂 sunitinib对EGF诱导的HaCaT细胞(HaCaT/E)增殖与凋亡的影响及内在机制。方法：1.采用细胞计数的方式检测EGF对HaCaT细胞增殖的影响；2.采用MTT检测sunitinib对HaCaT/E细胞增殖的影响；3.采用流式细胞仪检测sunitinib对HaCaT/E细胞周期,Western Blot检测sunitinib对HaCaT/E细胞周期蛋白cyclinD1和cyclinE1的表达水平的变化；4.采用流式细胞仪检测sunitinib对HaCaT/E细胞凋亡的影响,Western Blot检测sunitinib对HaCaT/E细胞凋亡相关蛋白cleaved-PARP表达水平的变化,电镜观察sunitinib对HaCaT/E细胞凋亡形态学的影响；5.采用Western Blot检测sunitinib对HaCaT/E细胞Stat3信号途径的影响。结果：1.EGF呈时间依赖性的增加HaCaT细胞的数量,在3d的培养期间内,用10ng/mL EGF处理的HaCaT细胞在各个时间点数量显著高于对照组细胞(P均<0.05)；2.MTT结果显示sunitinib抑制HaCaT/E细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性(P均<0.05)；3. Sunitinib呈浓度及时间依赖性降低HaCaT/E细胞S期的比例,并抑制细胞周期蛋白cyclinD1和cyclinE1的表达水平(P均<0.05)；4. Sunitinib呈浓度及时间依赖性诱导HaCaT/E细胞的凋亡,凋亡相关蛋白cleaved-PARP的表达量随sunitinib浓度的增高而出现表达量上调(P<0.05),电镜显示sunitinib处理HaCaT/E细胞24h后出现细胞体积变小,核染色质边集,浓缩,细胞质空泡形成等一系列细胞凋亡征象；5. Sunitinib预处理可显著抑制EGF诱导的HaCaT/E细胞p-Stat3蛋白的激活(P<0.05)。结论：1. Sunitinib能抑制EGF诱导的HaCaT(HaCaT/E)细胞的增殖,诱导其凋亡。2. Sunitinib可能通过Stat3信号途径介导细胞周期及凋亡相关蛋白表达而影响HaCaT/E细胞的增殖和凋亡。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
目录  8-9
縮略语表  9-12
第一部分材料和方法  12-22
  1.1 研究对象  12
  1.2 主要试剂和仪器  12-13
    1.2.1 主要试剂  12-13
    1.2.2 主要仪器  13
  1.3 主要试剂配制  13-16
  1.4 试验方法  16-21
    1.4.1 细胞培养  16-17
    1.4.2 绘制细胞生长曲线  17-18
    1.4.3 MTT法检测细胞增殖  18
    1.4.4 流式检测细胞周期  18-19
    1.4.5 Annexin Ⅴ-FITC/PI染色检测细胞凋亡  19
    1.4.6 Western Blot检测目的的蛋白表达水平  19-21
    1.4.7 电镜观察细胞形态学变化  21
  1.5 统计学分析  21-22
第二部分结果  22-27
  2.1 EGF对HACAT细胞增殖的影响  22
  2.2 SUNITINIB对HACAT/E细胞增殖的影响  22-23
  2.3 SUNITINIB对HACAT/E细胞周期的影响  23-24
  2.4 SUNITINIB对HACAT/E细胞凋亡的影响  24-25
  2.5 SUNITINIB抑制HACAT/E细胞中STAT3信号途径  25-27
第三部分讨论  27-29
第四部分结论  29-30
参考文献  30-34
综述  34-53
  参考文献  44-53
致谢  53

Sunitinib对EGF诱导的HaCaT细胞增殖与凋亡的影响及作用机制

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