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17β-雌二醇通过整联蛋白α1β1和α2β1抗大鼠髓核细胞凋亡的机制研究

作　者: 杨思东
导　师: 丁文元
学　校: 河北医科大学
专　业: 外科学
关键词: 17β-雌二醇腰椎退变凋亡整联蛋白胶原
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

目的：探索胞膜整联蛋白α1β1、α2β1参与的17β-雌二醇抗大鼠腰椎间盘细胞凋亡的作用机制。方法：酶消化法原代培养大鼠髓核细胞，贴壁细胞融合为单层时，用含EDTA的0.2%的胰酶消化传代.细胞生长至第3代时，用不含胎牛血清、不含酚红的DMEM/F12培养液培养，按以下分组实验，每组均为6个样本。对照组：加入少量乙醇作为对照；雌激素组：加入17β-雌二醇干预；雌激素+抑制剂组：加入17β-雌二醇和雌激素受体（ER）抑制剂ICI182780干预。细胞培养48小时后，应用：（1）免疫细胞化学法行II型胶原染色鉴定髓核细胞；（2）行流式细胞术以及TUNEL法检测细胞凋亡；（3）细胞-胶原粘附实验检测细胞与I、II型胶原的粘附水平；（4）western印迹法对整联蛋白亚基α1，α2，β1定量检测。结果：（1）原代腰椎髓核细胞呈多角形或长梭形，轮廓清楚，细胞核呈圆形或椭圆形，胞质内可见分泌颗粒,24～48h细胞贴壁,7～8d细胞进入对数生长期,可传6～8代,并分泌II型胶原。（2）免疫细胞化学检测到髓核细胞II型胶原呈阳性，髓核细胞纯度较高。（3）TUNEL法检测到雌激素可以有效地降低髓核细胞凋亡发生率；流式细胞术检测：髓核细胞早期凋亡率：对照组为4.00%0.16%；雌激素组为0.41%0.19%；雌激素+抑制剂组为3.20%0.05%。细胞晚期凋亡率：对照组为2.01%0.18%；雌激素组为0.50%0.10%；雌激素+抑制剂组为2.63%0.20%。各组细胞凋亡率的差异有统计学意义（F=24.20，P<0.001）。雌激素组凋亡率低于对照组（P<0.01）和雌激素+抑制剂组（P<0.01），对照组与雌激素+抑制剂组差异无统计学意义。（4）细胞与II型胶原粘附实验:各组OD值（吸光度）：对照组为0.600.03，95%CI(0.53,0.68)；雌激素组为0.730.04，95%CI(0.63,0.83)，雌激素+抑制剂组为0.550.07，95%CI(0.37,0.73)。各组细胞对I型胶原的粘附水平差异无统计学意义（P>0.05），对II型胶原的粘附水平差异有统计学意义（F=10.68，P<0.05），雌激素组高于对照组（P<0.05）和雌激素+抑制剂组（P<0.001），对照组与雌激素+抑制剂组差异无统计学意义。（5）整联蛋白2亚基条带的相对灰度值（/β-actin）：对照组为0.230.005，95%CI (0.22,0.24)；雌激素组为0.510.019，95%CI (0.46,0.55)；雌激素+抑制剂组为0.210.009，95%CI (0.18,0.23)。整联蛋白β1亚基条带的相对灰度值（/β-actin）：对照组为0.260.011，95%CI (0.24,0.29)；雌激素组为0.500.031，95%CI (0.43,0.58)；雌激素+抑制剂组为0.250.018，95%CI (0.20,0.29)。整联蛋白α1亚基表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。α2和β1亚基表达水平均有统计学差异，雌激素组高于对照组（P<0.01）和雌激素+抑制剂组（P<0.01），对照组与雌激素+抑制剂组无统计学差异。结论：17β-雌二醇抗大鼠髓核细胞凋亡，其作用机制为上调了整联蛋白α2β1的表达，进而增强了细胞与胞外II型胶原的粘附作用。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-8
前言  8-9
材料与方法  9-14
结果  14-16
附图  16-19
附表  19-21
讨论  21-23
结论  23
参考文献  23-25
综述失巢凋亡和细胞表面黏附分子  25-41
  参考文献  33-41
致谢  41-42
个人简历  42

17β-雌二醇通过整联蛋白α1β1和α2β1抗大鼠髓核细胞凋亡的机制研究

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