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利拉鲁肽对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

作 者: 李娟娟
导 师: 时照明
学 校:
专 业: 内科学
关键词: 高糖 内皮细胞 利拉鲁肽 核因子.κB 半胱氨酸蛋白酶-3 8-羟基脱氧鸟嘌呤
分类号: R96
类 型: 硕士论文
年 份: 2014年
下 载: 3次
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内容摘要


目的:研究高糖对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中细胞核因子.κ B(NuclearFactor kappa B,NF-κ B)、细胞上清液中半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、8羟基脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)表达的影响及Liraglutide的干预作用,进一步探讨Liraglutide是否能够真正有效地保护损伤的血管内皮细胞,为糖尿病血管并发症的防治提供新思路。方法:体外培养HUVECs,用不同浓度的葡萄糖(分别为:5.5、11.1、25、33.3mmol/L)培养液或高糖(33.3mmol/L)加入不同浓度的“利拉鲁肽”(5、10、25、50、100nmol/L)分别孵育细胞24、48h,用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测各实验组细胞生存率;根据MTT检测结果将细胞分为5组,分别是对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖组(33.3mmol/L)、高糖(33.3mmol/L)+低剂量利拉鲁肽组(25nmol/L)、高糖(33.3mmol/L)+中剂量利拉鲁肽组(50nmol/L)、高糖(33.3mmol/L)+高剂量利拉鲁肽组(100nmol/L),分别孵育24、48h后使用RT-PCR测定各实验组HUVECs中NF-κB mRNA的表达量,酶联接免疫吸附剂测定(ELISA)法测定各实验组细胞上清液中Caspase-3、8-OHdG的表达水平。所得数据采用SPSS19.0软件进行统计分析。结果:1.MTT法检测细胞生存率:与对照组(葡萄糖终浓度为5.5mmol/L)相比,25、33.3mmol/L葡萄糖浓度组在不同孵育时间(24、48h)其OD值减少均具有统计学意义(P<0.01),其中“高糖组”(葡萄糖终浓度为33.3mmol/L)OD值减小最明显(P<0.01),且在一定的高糖浓度(33.3mmol/L)作用下,病变随着时间的延长而逐渐加重(P<0.01);而与“高糖组”相比,加入了不同浓度的“利拉鲁肽组”OD值均较“高糖组”有所提高,其中25、50、100nmol/L“利拉鲁肽组”和“高糖组”比较,各实验组在不同孵育时间(24、48h)其OD值升高均有统计学意义(P<0.01),尤其“利拉鲁肽”浓度为100nmol/L时,作用最强。2.RT-PCR测定HUVECs细胞中NF-κB mRNA的表达量:对照组HUVECs中NF-κB mRNA表达水平较低;高糖组HUVECs中NF-κB mRNA水平较正常环境显著增加(P<0.01);经不同浓度“利拉鲁肽”干预后,HUVECs中NF-κB的mRNA水平较干预前显著减少,其中利拉鲁肽(50、100nmol/1)干预24、48h的NF-κBmRNA表达均有统计学意义(P<0.01)。利拉鲁肽和HUVECs共同孵育24小时后,随着利拉鲁肽浓度(25、50、100nmol/L)的增加, NF-κB mRNA表达水平明显减少(P<0.01)。3.ELISA法测定HUVECs细胞上清液中Caspase-3、8-OHdG的表达水平:与对照组相比,高糖组HUVECs细胞Caspase-3、8-OHdG分泌量明显增加(P<0.01),而与高糖组相比,经不同浓度“利拉鲁肽”作用后,HUVECs细胞Caspase-3、8-OHdG分泌量明显降低,并与“利拉鲁肽”呈浓度依赖性,其中“高糖+高剂量利拉鲁肽”组与“高糖”组比较有统计学意义(P<0.01)。结论:1.高糖加速了体外培养的人脐静脉内皮细胞的损伤,且细胞损伤的程度具有剂量和时间依赖性。2.Liraglutide降低细胞内NF-κ B mRNA的表达,减少HUVECs中氧化应激反应。3.Liraglutide降低细胞上清液中Caspase-3、8-OHdG的表达,减少高糖诱导的内皮细胞凋亡,同时减轻内皮细胞的氧化损伤。4.Liraglutide对体外高糖诱导的内皮细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与NF-κ B mRNA、Caspase-3、8-OHdG表达降低相关。

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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