学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

硬化治疗血管瘤用平阳霉素原位凝胶的研究

作　者: 高子彬
导　师: 陈大为
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 药剂学
关键词: 平阳霉素 血管瘤 原位凝胶 玉米醇溶蛋白 微渗析 小角X射线衍射技术 原子力显微镜 流变学 药物动力学 药效学
分类号: R94
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
下　载: 66次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


血管瘤的药物治疗主要是硬化剂注射治疗，其中平阳霉素（Pingyangmycin，PYM）是目前临床上应用最为广泛的一种硬化剂。但从文献报道中可以发现，平阳霉素作为硬化剂治疗海绵状血管瘤（临床上最为常见的血管畸形）时，治愈率并不高。本课题以平阳霉素作为模型药物，以原位凝胶作为药物的载体，对一种用于硬化治疗血管瘤的新型药物传递系统进行了研究。经单因素考察和正交实验，确定了原位凝胶的主要基质——玉米醇溶蛋白（Zein）的精制工艺。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果表明，精制所得的产品仅含有19 kDa和22 kDa两个分子量的条带。通过对有机溶剂、活性炭以及超临界萃取等脱色工艺的研究，确定了玉米醇溶蛋白的脱色工艺。考察了该制剂体外栓塞效果的影响因素，将240.0 mg·mL-1定为该制剂的玉米醇溶蛋白浓度；将拟栓塞血管瘤的最大引流血管口径定为2 mm；最为有效的栓塞部位是引流管口附近；适量的蔗糖醋酸异丁酯（sucrose acetate isobutyrate，SAIB）或PEG6000的加入对该制剂的栓塞效果无显著影响。凝胶相转变过程的流变学研究表明，在与生理盐水接触之后的几十秒内，原位凝胶溶液的G′、G″、η急剧增加（约两个数量级），而δ则急剧减小直至48-57°之间。说明在注入生理盐水之后，原位凝胶溶液与之接触的部分发生了从溶液向凝胶的相转变。SAIB的加入使平阳霉素原位凝胶的相角增大，从而调整其相转变行为，获得理想的栓塞和缓释效果。体外释放的研究表明，释放面积、凝胶量、震荡速度、温度等因素的均会影响平阳霉素原位凝胶的释放行为。PEG6000的加入可使药物释放加快，适当量的SAIB的加入会减小药物的突释，延长药物释放的时间；载药量加大可使药物释放加快，突释加大，释放时间缩短，释放得更加完全；释放介质中加入胰蛋白酶，可使药物的释放加快。应用小角X射线衍射（Small Angle X-ray Scattering，SAXS）技术对玉米醇溶蛋白在甲醛缩甘油中的三维结构进行了研究，测得其Rg和Rc分别为4.15±0.04 nm和1.78±0.03 nm，从而推断它在甲醛缩甘油中是以三维为13.0 nm×5.4 nm×3.0 nm的五聚体形式存在的。分别通过光学显微镜、扫描电镜和原子力显微镜（Atomic Force Microscope，AFM）对平阳霉素原位凝胶的结构进行观察，对平阳霉素原位凝胶形成及药物释放的机理进行了深入的探讨。采用微渗析取样技术测定了平阳霉素在家兔和家犬体外的血浆蛋白结合率，并应用一般血样取样法和微渗析取样法同时监测了平阳霉素在家兔体内的经时过程，计算得到了平阳霉素在家兔体内的血浆蛋白结合率为31.96±7.51％，与体外测得结果无显著性差异（P＞0.05）。平阳霉素原位凝胶在血管瘤模型中释放的研究表明，平阳霉素原位凝胶可明显的延长平阳霉素在局部的滞留时间，SAIB可以明显减少平阳霉素原位凝胶早期的突释，并使其后期的释放保持一定速度，使药物释放时间长达4天，局部药物浓度保持在10μg·mL-1左右。通过观察细胞形态学变化、绘制细胞生长曲线以及MTT法，研究了平阳霉素及其原位凝胶对人脐静脉内皮细胞ECV304的抑制作用，结果表明平阳霉素对ECV304细胞的抑制作用具有明显的时间和浓度依赖性，作用24、48、72h后的IC50分别为16.05±1.21、1.99±0.56和0.29±0.18μg·mL-1。应用分子生物学技术，研究了平阳霉素作用后的ECV304细胞DNA含量变化，对平阳霉素抑制ECV304细胞生长的机理进行初步探讨，发现此作用是通过诱导细胞凋亡和造成细胞坏死两条途径实现的。平阳霉素原位凝胶对ECV304细胞抑制作用的研究表明，该原位凝胶有明显的缓释作用。以家兔耳缘静脉系统为血管畸形模型，研究了应用平阳霉素溶液、空白原位凝胶、PYM-Zein原位凝胶及PYM-Zein-SAIB原位凝胶后耳缘静脉的形态学及组织学的变化，结果表明，PYM-Zein-SAIB原位凝胶能有效地栓塞家兔的耳缘静脉并使之闭锁，且炎性反应较PYM-Zein原位凝胶小，疗效明显优于平阳霉素溶液、空白原位凝胶和PYM-Zein原位凝胶。PYM-Zein-SAIB原位凝胶是较为理想的治疗血管瘤的药物传递系统。

全文目录


中文摘要  13-15
英文摘要  15-17
前言  17-27
  1 血管瘤和血管畸形的介绍  17-18
  2 血管瘤的治疗现状  18-21
  3 治疗血管瘤药物的主要剂型  21-22
  4 溶剂敏感类型原位凝胶的研究进展  22-23
  5 课题的提出及本文内容  23-24
  参考文献  24-27
第一章 原位凝胶基质——玉米醇溶蛋白的精制  27-38
  1 材料与仪器  27
    1.1 材料  27
    1.2 仪器  27
  2 方法  27-29
    2.1 α玉米醇溶蛋白的提取  27-28
      2.1.1 工艺  27
      2.1.2 单因素考察  27-28
      2.1.3 正交实验  28
      2.1.4 工艺验证实验  28
      2.1.5 成分检测  28
    2.2 脱色  28-29
      2.2.1 色素浓度与吸收度的关系  28
      2.2.2 活性炭脱色  28-29
    2.3 产品干燥  29
  3 结果与讨论  29-37
    3.1 玉米醇溶蛋白的应用  29-30
    3.2 α玉米醇溶蛋白的提取  30-33
    3.3 脱色  33-37
    3.4 产品干燥  37
    3.5 最终工艺  37
  参考文献  37-38
第二章 平阳霉素原位凝胶的制备及其性质的研究  38-69
  1 仪器与材料  38
    1.1 仪器  38
    1.2 材料  38
  2 方法与结果  38-62
    2.1 平阳霉素体外分析方法的建立  38-42
    2.2 平阳霉素相关理化性质的研究  42
      2.2.1 平阳霉素溶液的稳定性  42
      2.2.2 平阳霉素平衡溶解度  42
    2.3 玉米醇溶蛋白溶解性能的研究  42-43
    2.4 添加剂的初步筛选  43
    2.5 平阳霉素原位凝胶的制备及体外栓塞的研究  43-48
      2.5.1 玉米醇溶蛋白、蔗糖醋酸异丁酯和甲醛缩甘油的三元相图的绘制  43-44
      2.5.2 平阳霉素原位凝胶的制备  44
      2.5.3 原位凝胶的体外栓塞实验  44-48
    2.6 平阳霉素原位凝胶流变学  48-54
      2.6.1 仪器  48
      2.6.2 测定方法及结果  48-54
    2.7 平阳霉素原位凝胶溶液表观黏度的测定  54
    2.8 平阳霉素原位凝胶的体外释放  54-61
      2.8.1 体外释放装置  54-55
      2.8.2 平阳霉素原位凝胶的体外释放  55-61
    2.9 含量测定及稳定性实验  61-62
      2.9.1 含量测定  61
      2.9.2 稳定性实验  61-62
  3 讨论  62-67
  参考文献  67-69
第三章 平阳霉素原位凝胶微观结构的研究  69-93
  第一节 α玉米醇溶蛋白在甲醛缩甘油中的三维结构  69-78
    1 仪器与材料  69
      1.1 仪器  69
      1.2 材料  69
    2 方法  69-70
      2.1 样品的制备  69-70
      2.2 α玉米醇溶蛋白在甲醛缩甘油中的微分比容  70
      2.3 小角X-线衍射  70
      2.4 小角X-线衍射结果分析方法  70
    3 结果  70-75
      3.1 微分比容  70-71
      3.2 α玉米醇溶蛋白的均方根旋转半径(Rg)和横截面的旋转半径(Rc)  71-75
    4 讨论  75-78
      4.1 小角X-线衍射概况  76
      4.2 α玉米醇溶蛋白的模型  76-78
  第二节 平阳霉素原位凝胶的显微镜观察  78-90
    1 仪器  78
    2 方法  78-79
      2.1 处方  78
      2.2 平阳霉素原位凝胶的制备  78
      2.3 平阳霉素原位凝胶冰冻切片的制备  78
      2.4 平阳霉素原位凝胶扫描电镜样品制备  78
      2.5 玉米醇溶蛋白原子力显微镜样品制备  78-79
      2.6 平阳霉素原位凝胶原子力显微镜样品制备  79
    3 结果与讨论  79-90
      3.1 平阳霉素原位凝胶冰冻切片的观察  79-80
      3.2 平阳霉素原位凝胶扫描电镜的观察  80-83
      3.3 平阳霉素原位凝胶原子力显微镜的观察  83-90
        3.3.1 原子力显微镜简介  83-84
        3.3.2 玉米醇溶蛋白及平阳霉素原位凝胶的原子力显微镜观察  84-90
  参考文献  90-93
第四章 平阳霉素及其原位凝胶的药动学研究  93-117
  1 仪器与材料  93
    1.1 仪器  93
    1.2 材料  93
    1.3 动物  93
  2 方法及结果  93-109
    2.1 微渗析探针回收率影响因素的考察  93-96
      2.1.1 色谱条件  93
      2.1.2 标准曲线  93-94
      2.1.3 正、反向渗析对微渗析探针回收率的影响  94
      2.1.4 温度对微渗析探针回收率的影响  94
      2.1.5 平阳霉素浓度对微渗析探针回收率的影响  94
      2.1.6 灌流速度对微渗析探针回收率的影响  94-95
      2.1.7 搅拌对微渗析探针回收率的影响  95
      2.1.8 测定方法微渗析探针回收率的影响  95-96
    2.2 血浆样品的考察  96-101
      2.2.1 平阳霉素在家兔体外血浆中的蛋白结合率  96-99
      2.2.2 平阳霉素在家犬体外血浆中的蛋白结合率  99-101
    2.3 微渗析取样与传统取样方法在研究平阳霉素家兔体内药动学中的比较  101-105
      2.3.1 传统取样  101-104
      2.3.2 微渗析取样  104-105
      2.3.3 药动学分析  105
    2.4 平阳霉素原位凝胶在血管畸形模型内的释放  105-109
      2.4.1 血管畸形模型的建立  105
      2.4.2 微渗析探针的植入  105-106
      2.4.3 色谱条件  106
      2.4.4 标准曲线  106-107
      2.4.5 在体回收率  107-108
      2.4.6 平阳霉素原位凝胶在血管畸形模型内的释放  108-109
  3 讨论  109-114
    3.1 血液微渗析概况  109-110
    3.2 血液微渗析探针类型  110
    3.3 探针的植入  110
    3.4 微渗析探针的校正  110-111
    3.5 微渗析探针回收率的影响因素  111-112
    3.6 体内外血浆蛋白结合率的测定  112-113
    3.7 根据微渗析数据的动力学参数的计算  113
    3.8 平阳霉素原位凝胶在血管畸形模型内的释放  113-114
      3.8.1 血管畸形模型的选择  113-114
      3.8.2 平阳霉素原位凝胶的在体释放  114
  参考文献  114-117
第五章 平阳霉素及其原位凝胶抑制人脐静脉内皮细胞生长的研究  117-133
  1 材料与仪器  117
    1.1 材料  117
    1.2 细胞株  117
    1.3 仪器  117
  2 方法与结果  117-127
    2.1 平阳霉素诱导ECV-304细胞凋亡  117-121
      2.1.1 正常ECV-304细胞的培养  117-118
      2.1.2 平阳霉素诱导ECV-304细胞凋亡的形态学观察  118-120
      2.1.3 DNA琼脂糖凝胶电泳法  120-121
    2.2 MTT法检测平阳霉素及平阳霉素原位凝胶对ECV304细胞生长的抑制作用  121-123
    2.3 ECV304细胞生长曲线绘制  123-124
    2.4 流式细胞仪测定平阳霉素对ECV304细胞周期及凋亡的影响  124-127
      2.4.1 流式细胞仪检测条件及参数  124
      2.4.2 细胞周期检测  124-125
      2.4.3 细胞凋亡检测  125-127
  3 讨论  127-131
  参考文献  131-133
第六章 平阳霉素原位凝胶的药效学研究  133-139
  1 材料  133
    1.1 材料  133
    1.2 动物  133
  2 方法与结果  133-137
    2.1 方法  133
    2.2 结果  133-137
      2.2.1 家兔耳缘静脉肉眼观察  133-134
      2.2.2 家兔耳缘静脉组织学观察  134
      2.2.3 主要器官的组织学观察  134
      2.2.4 家兔存活情况  134-137
  3 讨论  137-138
  参考文献  138-139
全文结论  139-141
博士论文工作期间的主要成果  141-142
致谢  142

相似论文

  1. 不同条件下兔骨骼肌肌球蛋白流变学特性的研究,TS251.1
  2. 天山雪莲指纹图谱及总黄酮提取物研究,R284.1
  3. 平阳霉素胸膜固定术对恶性胸腔积液中凝血—抗凝活性的影响,R730.5
  4. 恩诺沙星缓释制剂的制备及其药物动力学研究,R96
  5. 肌原纤维蛋白热诱导凝胶形成机制研究,TS251.1
  6. LC-MS/MS法研究黄体酮乳膏剂在Beagle犬体内的药物动力学,R96
  7. 黄芩苷液体栓的制备与体内外评价,R283
  8. 超滤对婴幼儿体外循环血液流变学的影响,R726.1
  9. 肝血管瘤剥脱术与规则性肝切除术的术式探讨,R735.7
  10. 血浆内皮素-1及血流变与原发性青光眼视功能损害相关性研究,R775
  11. 平阳霉素对淋巴管畸形的疗效分析（46例）,R782.2
  12. 天舒胶囊效应部位组的探索性研究,R283
  13. MTX保守治疗胎盘植入乳汁及血清浓度监测,R714.22
  14. 普萘洛尔对体外培养婴幼儿血管瘤内皮细胞VEGF、MMP-2的影响及意义,R739.5
  15. 杜仲和离、向心运动对大鼠运动能力及血液流变性等指标的影响研究,G804.2
  16. 新型合成水蛭肽Hirulog-s抗动脉血栓和抗弥散性血管内凝血作用的实验研究,R965
  17. 射干扶正口服液的研制及其药效学初探,R285.5
  18. 缬草提取物包衣片的制备与评价,TQ461
  19. 玉米黄粉中醇溶蛋白的提取纯化及增塑成膜研究,TS239
  20. 艾迪冻干粉针的制备与评价,R286
  21. Fe-Mn-Si-Al TRIP/TWIP钢组织及性能的研究,TG142.33

中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药剂学
© 2012 www.xueweilunwen.com