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靶向性抗肿瘤药物EGF-E4rf4的制备和鉴定

作　者: 倪蓓蓓
导　师: 陈虹
学　校: 北京协和医学院
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: EGFR EGF 腺病毒E4orf4 抗肿瘤作用多聚体
分类号: R943
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 29次
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内容摘要

近年来,肿瘤的发病率和死亡率不断攀升,严重危害了人类的生命健康,而传统的肿瘤治疗方法和药物存在很多问题,所以研究和开发新型靶向性抗肿瘤药物,具有重要的社会意义和广泛的应用前景。本课题利用EGF与EGFR结合的靶向性及腺病毒E4orf4蛋白选择性杀伤肿瘤细胞的细胞毒性而设计并构建的融合蛋白EGF-E4orf4的酵母表达载体,并在毕赤酵母中分泌性的表达了EGF-E4orf4融合蛋白。前期工作对融合蛋白的生物活性和药效学进行了初步研究：细胞学实验显示,融合蛋白EGF-E4orf4对人乳腺癌细胞MDA-MB-231,人脑神经胶质瘤细胞BT325和人骨肉瘤细胞Saos-2都有抑制作用。动物实验显示,融合蛋白EGF-E4orf4可以抑制MDA-MB-231和BGC823田胞的裸鼠移植肿瘤的生长,最大抑瘤率分别为79%49%(P<0.05)。在急毒实验中未发现EGF-E4orf4蛋白对裸鼠有任何毒副作用。因此融合蛋白EGF-E4orf4很有希望成为治疗肿瘤的新药。本论文的第一部分工作,主要是针对融合蛋白EGF-E4orf4的表达和纯化条件,做了进一步优化以争取提高目的蛋白的纯度、提高纯化效率。同时,配合合作单位在中试发酵生产和纯化工艺方面进行了实验摸索。在此基础上对得到的融合蛋白纯品进行了一些理化及生物活性性质鉴定,为今后融合蛋白EGF-E4orf4实现大规模工业化生产创造条件。本论文的第二部分工作系鉴定证实融合蛋白是以多聚体形式存在,并对其结构做了一些实验分析,希望找到其聚合的原因,从而为获得融合蛋白单体创造条件。本研究工作为进一步开展重组融合蛋白中试制备工艺的研究提供了有意义的借鉴,对融合蛋白聚合的生物学性质进行了一些探索,为将来实现融合蛋白EGF-E4orf4工业生产并真正应用于临床的肿瘤治疗奠定了基础。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-7
缩略词表  7-9
前言  9-13
实验材料  13-21
第一部分 EGF-E4orf4的表达、纯化和鉴定  21-46
  1 实验方法  21-31
  2 实验结果  31-44
  3 讨论  44-46
第二部分 EGF-E4orf4多聚体的鉴定及结构探究  46-62
  1 实验方法  46-49
  2 实验结果  49-60
  3 讨论  60-62
总结  62-63
参考文献  63-66
综述  66-76
  参考文献  72-76
致谢  76-77
个人简历  77-78

靶向性抗肿瘤药物EGF-E4rf4的制备和鉴定

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