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DNA/RNA同步提取方法学的建立及其法医学应用研究

作　者: 秦娟娟
导　师: 唐晖
学　校: 山西医科大学
专　业: 法医学
关键词: 法医学 Trizol RNA DNA 同步提取
分类号: D919.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的为了更好的确定微量生物检材的个体来源和组织来源,本课题旨在建立一种用Trizol试剂对法庭科学中同一生物检材同步提取 DNA/RNA的新方法；用建立的方法对五种法医相关体液DNA进行检测,以进一步验证所建立方法的有效性；并探索建立这五种体液的特异性mRNA复合扩增体系。方法制备同一个体的外周血FTA卡样本20份,每份含10μL外周血。分为两组：普通Trizol法组,按照Trizol试剂说明书对样本DNA进行提取；改良Trizol法组,通过改变普通Trizol法收集水相总RNA后余下的中间层和有机相的pH,用乙醇沉淀当中的DNA,然后用Promega DNA IQTM试剂盒纯化。检测两种方法提取DNA的纯度和浓度,并以之为模板进行终点PCR和STR检测,比较两种方法提取DNA的纯度、浓度及STR分型；两种方法总RNA的提取均按照试剂说明书进行,使用本课题组成员前期所建立的方法检测RNA的提取效果；利用所建立的改良Trizol法对外周血、唾液、精液、阴道分泌物、月经血DNA/RNA进行提取,检测提取DNA的STR分型；选取扩增条件相同的9对引物,包括7对以上五种体液的特异性mRNA引物和2对管家基因的引物,并根据片段大小对引物标记不同荧光,初步建立同一生物检材的mRNA复合RT-PCR体系,用毛细管凝胶电泳法对mRNA逆转录扩增产物进行检验。结果1改良Trizol法可以对同一检材的DNA/RNA进行同步提取。2改良Trizol法提取的10μL外周血DNA纯度为1.470±0.065,浓度为1.498+0.297ng/μL。普通Trizol法提取的基因组DNA纯度为1.301+0.065,浓度为0.618±0.209ng/μL。扩增STR分型均良好。RNA提取效果良好。3改良Trizol法提取外周血、唾液、精液、阴道分泌物、月经血DNA均可获得良好的STR分型。4利用9对引物建立的五种复合扩增体系所得到的多荧光标记mRNA片段峰图准确、稳定。结论改良Trizol法可靠易行,能够实现同一样本中同时提取RNA和DNA的目的。与mRNA复合扩增体系结合更加能够满足法医学实验确定少量生物检材的个体来源和组织来源高自动化、快速、灵敏、准确、稳定、重复性好的要求。

全文目录

目录  4-5
摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-10
第一部分改良Trizol法同步提取外周血DNA/RNA方法学的建立  10-28
  1 材料  10-12
  2 方法  12-16
  3 结果  16-23
  4 讨论  23-27
  5 小结  27-28
第二部分改良Trizol法的法医学应用研究  28-44
  1 材料  28-30
  2 方法  30-33
  3 结果  33-38
  4 讨论  38-44
参考文献  44-46
综述  46-55
  参考文献  52-55
攻读学位期间发表论文情况  55-56
致谢  56-57
个人简介  57

DNA/RNA同步提取方法学的建立及其法医学应用研究

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