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MTHFR C677T基因多态性与肺动脉栓塞相关性研究

作 者: 曹晨
导 师: 王英元
学 校: 山西医科大学
专 业: 法医学
关键词: 法医病理学 肺动脉栓塞 DNA提取 亚甲基四氢叶酸还原酶 基因多态性
分类号: D919.4
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要


研究目的运用改良酚-氯仿法从福尔马林固定组织中提取DNA,对比心、肝、肺、脑四种脏器DNA提取质量的优劣,了解哪种经福尔马林固定后的组织易于得到质量较为可靠的DNA,以达到从福尔马林固定组织中提取DNA,进行目的片段扩增,从而探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)突变基因C677T与肺动脉栓塞的关系,为肺动脉栓塞导致死亡的法医病理检验提供参考依据。材料方法1.福尔马林固定的不同组织中DNA提取的比较:选取福尔马林固定标本脏器各14例,以蛋白酶K消化和酚氯仿抽提法提取检材中DNA,对所得DNA质量以紫外分光光度计、PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析进行结果判断。2.MTHFR C677T基因多态性与肺动脉栓塞相关性研究:选取福尔马林固定由肺栓导致死亡的死者肝脏14例(肺栓组),用改良酚氯仿抽提法提取DNA,以及正常血痕60例(对照组),用Chelex-100提取其DNA,以上两组均经行同一目的片段PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳后观察两组目的条带差异,并对其基因型与等位基因频率进行计数。结果1.福尔马林固定的不同组织中DNA提取的比较:心、肝、肺、脑四种组织所提DNA的OD260/OD280比值分别为1.842±40.380、1.861±0.076、1.387±0.113、1.428±0.087。每100mg组织中DNA含量(μg)分别为0.944±0.530、1.096±0.544、0.348±0.273、0.601±0.238。PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳分析显示,心肌和肝脏组织的条带清晰度要好于肺和脑组织。2. MTHFR C677T基因多态性与肺动脉栓塞相关性研究:MTHFR C677T基因型CC、CT和TT在肺栓组的分布频率为:35.7%、57.2%和7.1%;在对照组的分布频率为:50%、43.3%和6.7%,肺栓组CT、TT基因型频率和T等位基因频率明显高于对照组。但两组基因型和等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05)。与CC基因型相比,CT、TT基因型危险度评估也均无统计学意义。结论1.福尔马林固定的不同组织中DNA提取的比较:经福尔马林浸泡固定的心肌组织和肝脏组织,运用改良酚-氯仿抽提法所得DNA质量较为可靠,可以用于后续研究。2.MTHFR C677T基因多态性与肺动脉栓塞相关性研究:MTHFR C677T多态性中的基因型可能与现有样本肺动脉栓塞的发生无相关性。

全文目录


目录  4-5
摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-11
材料与方法  11-15
结果  15-19
讨论  19-22
结论  22-23
参考文献  23-25
综述  25-37
  参考文献  34-37
个人简介  37-38
致谢  38-39

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