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PIDD对电离辐射所致BV-2细胞炎症反应的调节作用及其机制的初步研究

作　者: 屈晓飞
导　师: 伍钢
学　校: 华中科技大学
专　业: 肿瘤学
关键词: PIDD PIDD-C NF-κB 小胶质细胞 BV-2 放射性脑损伤
分类号: R818
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

【背景与目的】：P53诱导含有死亡结构域蛋白（PIDD,P53-inducedproteinwith a death domain）作为肿瘤抑制因子P53的靶蛋白之一，在调节细胞周期和细胞凋亡中发挥重要作用。但是PIDD在小胶质细胞电离辐射所导致的炎症反应中作用与机制的研究未见报道，本研究旨在探讨PIDD在小鼠小胶质细胞（BV-2）中的表达及其在电离辐射后炎症反应中的作用与机制。【方法】：1，针对小鼠来源的PIDD序列设计3条抗PIDD反义寡核苷酸（anti-PIDD-si-RNA，antisense oligonucleotides targeting PIDD mRNA）及其阴性对照反义寡核苷酸。2，使用带有GFP荧光蛋白标记的空白质粒与siRNA共转染BV-2细胞，转染后，使用荧光显微镜观察转染效率；使用实时荧光定量PCR淘选出沉默效率最高的anti-PIDD-si-RNA。3，使用沉默效率最高的anti-PIDD-si-RNA及阴性对照siRNA分别转染BV-2细胞后12小时，以0和32Gy两个放射剂量照射BV-2细胞。4，实时荧光定量PCR检测各组细胞照射后不同时间点(0h,3h,6h,12h,24h)PIDD及TNF-α，IL-1β（炎症反应因子）的mRNA变化。5，免疫蛋白印迹法（western blotting）检测各组细胞PIDD蛋白，NF-κB蛋白的表达。6，激光共聚焦显微镜观察各组细胞Iba-1及CD68（小胶质细胞激活标志蛋白）的表达。7，transwell小室实验观察各组细胞迁移能力变化。8，电子显微镜观察各组细胞照射后超微结构变化。【结果】：1，siRNA转染效率可以达到50%至60%，anti-PIDD-si-RNA2沉默效率最高。2，BV-2细胞电离辐射后其PIDD，TNF-α及IL1-β的mRNA水平升高；转染anti-PIDD-si-RNA2的BV-2细胞较转染阴性对照组细胞，照射后PIDD，TNF-α及IL1-β的mRNA水平明显下调。3，BV-2细胞电离辐射后PIDD蛋白表达随着时间变化（24h内）先升高后降低，NF-κB蛋白表达持续升高；转染anti-PIDD-si-RNA2的BV-2细胞较转染阴性对照组细胞PIDD的蛋白表达较对照组下降，NF-κB蛋白表达下降。4，BV-2细胞照射后，Iba-1，CD68表达明显增加；转染anti-PIDD-si-RNA2的BV-2细胞较单纯对照组细胞，照射后Iba-1，CD68表达明显减少。5，照射后BV-2细胞迁移能力增强；转染anti-PIDD-si-RNA2的BV-2细胞较单纯照射组细胞的迁移能力明显减弱。6，BV-2细胞照射后次级溶酶体增多，可见高尔基体、内质网线粒体变型严重；转染anti-PIDD-si-RNA2的BV-2细胞较单纯照射组细胞次级溶酶体减少，初级溶媒体比例增加，未见高尔基体，内质网及线粒体变性减轻。【结论】：下调PIDD可能通过PIDD/NF-κB信号转导途径抑制小胶质细胞激活及BV-2细胞炎症因子表达。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
材料与方法  12-23
结果  23-32
讨论  32-35
小结  35-36
参考文献  36-39
综述  39-44
  参考文献  42-44
致谢  44

PIDD对电离辐射所致BV-2细胞炎症反应的调节作用及其机制的初步研究

内容摘要

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