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梅毒螺旋体Tp92蛋白的抗原表位筛选与鉴定

作　者: 曹龙古
导　师: 曾铁兵
学　校: 南华大学
专　业: 病原生物学
关键词: 梅毒螺旋体 Tp92 B细胞表位 T细胞表位
分类号: R759
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的：筛选和鉴定梅毒螺旋体(Treponema pallidum, Tp)Tp92蛋白的B、Th和联合B-Th细胞抗原表位，为深入探讨这些表位在梅毒表位疫苗中的作用奠定基础。方法：(1)从GenBank获取Tp92蛋白氨基酸序列，预测其信号肽序列；采用亲水性、柔韧性、抗原指数及表面可能性方案，以IEDB和Bcepred软件分析工具综合预测Tp92蛋白的B细胞表位；以RANKPEP、SYFPEITHI软件预测综合预测Tp92蛋白的HLA-DRBl限制性Th细胞表位；根据上述结果综合预测Tp92蛋白的联合B-Th细胞表位。(2) RP—HPLC人工合成和纯化预测的表位多肽，质谱分析和鉴定合成多肽。(3)以梅毒患者血清(同时设健康人血清对照)，用间接ELISA鉴定预测Tp92蛋白的B细胞表位或联合B-Th细胞抗原表位。(4)分离培养梅毒患者和正常人外周血单个核细胞(PBMC)，以预测合成的Th或联合Th-B细胞抗原表位刺激培养的PBMC，同时设ConA (阳性对照)和RPMI-1640(阴性对照)刺激，用CCK-8淋巴细胞增殖试剂盒检测培养PBMC中淋巴细胞增殖水平，鉴定Tp92中预测的T细胞表位；同时以ELISA试剂盒检测培养的淋巴细胞分泌INF-γ和IL-4的水平，以鉴定Th细胞表位的类型。结果：(1)综合分析计算机预测方案，筛选出P1(Tp9224-39AA)、P2(Tp92332-347AA)、P3(Tp92520-536AA)、P4(Tp92575-588AA)、P5(Tp92103-118AA)、P6(Tp92694-712AA)为Tp92候选B细胞表位；P5(Tp92103-118AA)、P6(Tp92694-712AA)、P7(Tp92668-680AA)、P8(Tp92300-313AA)、P9(Tp92396-410AA)为Tp92候选Th细胞表位；P5、P6为候选联合Th-B表位。(2)经RP-HPLC纯化及纯度分析，合成多肽纯度均大于90%；质谱分析合成多肽分子量测定值与理论值一致。(3) ELISA分析表明，预测的P1、P2、P3、P4、P5、P6均与梅毒患者血清反应呈阳性，而与健康人血清不反应。(4)淋巴细胞增殖试验表明，P6、P7、P9能诱导梅毒患者淋巴细胞明显增殖，而不能诱导正常人淋巴细胞增殖；P6、P7、P9诱导梅毒患者淋巴细胞产生较高水平IFN-γ；P5、P6、P7、P8、P9均未能诱导梅毒患者淋巴细胞明显产生IL-4。结论：本研究初步得出以下结论：(1) P1、P2、P3、P4、P5、P6为Tp92蛋白潜在的特异性B细胞表位，尤其是P3和P6；(2) P6、P7、P9为Tp92蛋白潜在的HLA-DRBl限制性特异性Th1型细胞表位；(3) P6为Tp92蛋白潜在的特异性联合B-Th1细胞表位。

全文目录

主要缩略语英文索引  4-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-12
实验材料  12-14
  1 血清/全血标本及来源  12
  2 主要仪器  12
  3 主要试剂/试剂盒  12-14
实验方法  14-20
  1 梅毒螺旋体 Tp92 抗原 B、T 细胞表位的预测  14-15
  2 Tp92 抗原预测 B、T 细胞表位的合成与纯化  15
  3 Tp92 抗原预测 B 细胞表位的鉴定  15-17
  4 Tp92 抗原预测 T 细胞表位的鉴定  17-20
结果  20-26
  1 B、Th细胞表位预测  20-21
  2 Tp92 抗原预测 B、T 细胞表位的合成与纯化  21
  3 间接ELISA法测定Tp92预测B细胞表位的免疫反应性  21-22
  4 Tp92 抗原预测 T 细胞表位的鉴定  22-26
讨论  26-30
结论  30-31
参考文献  31-35
附录一  35-38
附录二  38-41
综述  41-50
在读期间科研成果  50-51
致谢  51-52

梅毒螺旋体Tp92蛋白的抗原表位筛选与鉴定

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