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MicroRNA-210对CD4+T细胞活化的调控及其在寻常型银屑病发病中的作用

作　者: 王利涛
导　师: 苏玉文
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: 寻常型银屑病 miR-210 CD4+T细胞 FOXP3 细胞因子
分类号: R758.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：寻常型银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病,以鳞屑性红斑为特征,因影响外观,给患者造成严重的心理负担。寻常型银屑病的病因及发病机制尚不明确,目前研究认为T细胞介导的免疫反应,特别是Thl细胞介导的自身免疫反应及调节性T细胞免疫抑制功能缺陷,在寻常型银屑病发病中起重要作用。越来越多的研究表明microRNAs通过调控相应靶基因的表达在CD4+T细胞的异常活化中起着十分重要的作用。我们课题组之前利用Affymetrix microRNA基因芯片技术比较了9例寻常型银屑病患者及9例健康对照外周血单个核细胞(PBMCs)中microRNAs表达水平的差异并通过RT-PCR进行验证,发现microRNA-210(miR-210)在寻常型银屑病患者PBMCs中表达明显升高。本课题进一步探索了miR-210在寻常型银屑病免疫失调中的作用及机制,为揭示该病的发病机制提供新的思路。方法：收集18例寻常型银屑病病人及18例正常对照的健康人外周血,利用密度梯度离心法分离PBMCs,免疫磁珠法分离CD4+T细胞。利用实时荧光定量PCR (realtime PCR)检测miR-210表达水平；利用Mirbase/Targetscans/PicTar等生物信息学软件在线预测miR-210的潜在靶基因；选择可能与寻常型银屑病发病相关的靶基因,进而利用荧光素酶报告基因系统验证两者之间的调控关系；利用realtimePCR检测CD4+T细胞中miR-210潜在靶基囚mRNA的表达水平,同时利用Western blot检测其蛋白水平；利用T淋巴细胞转染试剂盒将miR-210mimic或inhibitor及其阴性对照分别转染正常人及寻常型银屑病病人CD4+T细胞；利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清中细胞因子水平。结果：与正常对照相比,miR-210在寻常型银屑病人CD4+T细胞中表达水平明显升高；Mirbase/Targetsc ans/P icTar等生物信息学软件预测显示转录因子FOXP3是miR-210的潜在靶基因之一,荧光素酶报告基因系统证实FOXP3为miR-210的靶基因；在寻常型银屑病人CD4+T细胞中FOXP3表达水平明显降低,与miR-210的表达水平呈显著负相关。在正常人CD4+T细胞中过表达miR-210时,与对照组相比,FOXP3蛋白表达水平明显下降,同时细胞因子IL-10、TGF-β表达水平亦明显降低,而IFN-γ表达水平明显升高；相反,在寻常型银屑病外周血CD4+T细胞中的特异性抑制miR-210表达时,FOXP3蛋白表达水平明显升高,同时细胞因子IL-10、TGF-β表达水平亦明显升高,而IFN-γ表达水平明显降低。结论：miR-210在寻常型银屑病CD4+T细胞中过度表达,并通过抑制其靶基因FOXP3表达,导致CD4+T细胞的异常活化,炎性因子分泌增加,进而参与银屑病的发生、发展。图24个,表20个,参考文献45篇。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
缩略词  10-11
1 前言  11-13
2 材料与方法  13-33
  2.1 研究对象  13-14
  2.2 仪器设备及试剂  14-19
  2.3 实验步骤  19-33
3 结果  33-50
  3.1 寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞MIR-210表达水平  33-36
  3.2 FOXP3是MIR-210的靶基因  36-38
  3.3 寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞MFOXP3的RNA和蛋白表达水平  38-41
  3.4 过表达MIR-210对调节性T细胞关键基因FOXP3及相关细胞因子表达的影响  41-45
  3.5 在寻常型银屑病患者CD4+T细胞中抑制MIR-210表达对调节性T细胞关键基因FOXP3及细胞因子表达的影响  45-50
4 讨论  50-53
5 结论  53-54
参考文献  54-58
综述  58-65
  参考文献  61-65
攻读学位期间主要的研究成果  65-66
致谢  66

MicroRNA-210对CD4+T细胞活化的调控及其在寻常型银屑病发病中的作用

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