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脐血多能干细胞对重症斑秃的临床治疗及相关免疫机制研究

作　者: 王贺朋
导　师: 李艳佳
学　校: 河北医科大学
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 斑秃脐血多能干细胞干细胞教育器自身免疫免疫调节细胞因子 TGF-β1
分类号: R758.71
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

目的：探讨脐血多能干细胞（human cord blood-derived multipotent stemcells，CB-SCs）对重症斑秃（alopecia areata，AA）的临床治疗作用，并初步评估其疗效；其次评估其对自身免疫的调节。方法：1使用脐血多能干细胞治疗9例严重的斑秃患者。分离出的脐血多能干细胞，转移到一个由9层培养皿组成的干细胞教育器（Stem CellEducator）中，在37℃，8%CO2的条件下在含有1640和7%胎牛血清的培养基上进行培养，待80%-90%的细胞汇合后进行治疗。干细胞教育器是一个闭合的回路系统，使用带有16号IV型针头的采血袋，连接血细胞采集仪进行肘正中静脉采血，同时采出的全血经过血细胞采集仪分离出患者的淋巴细胞，收集到的淋巴细胞被转移到教育器中与脐血多能干细胞共同培养，其它的血液成分自动地回输到患者体内。经过教育的淋巴细胞与生理盐水通过患者的手背静脉回输到体内。脐血多能干细胞紧紧地黏附于教育器的内表面，所以仅是经受脐血多能干细胞教育的自体淋巴细胞被回输到患者体内。整个过程大概需要8-9个小时。随访观察1、3、6、9和12个月患者毛发再生的情况，并进行拍照做治疗前和治疗后的对比。29例患者在治疗前和治疗后1个月时采集外周静脉血，用流式细胞仪分别检测IL-4、IL-13、IL-17A、TNF-α、TGF-β1、IL-5、IL-12和FoxP3的表达水平，以及CD28和ICOS-CD278的表达水平。39例患者在治疗前和治疗后3个月时行头皮病理组织活检，使用石蜡切片做HE染色，使用冰冻切片做直接免疫荧光染色，染色抗体分别为TGF-β1、CD14、CD11b、CD83、DEC205和FoxP3。结果：1临床治愈有2例，其中全秃1例，斑秃1例。显效1例，为普秃患者在治疗后3个月时有80%以上的头发长出，同时眉毛和胡须也长出。好转5例，其中普秃1例，为自1岁时出现脱发的17岁的患者，在治疗后3个月时其眉毛和胡须出现再生。斑秃1例，在治疗后3个月时其双手十指甲板上小凹明显减少变浅。无效1例，为普秃患者对此治疗没有反应。2流式细胞仪检测表明斑秃患者在接受治疗后，IL-4（P<0.05)和IL-5（P<0.05)在治疗后出现了升高， IL-13（P>0.05）虽然无统计学意义，但在治疗后也有升高的趋势。故患者表现出了Th2细胞因子的上调（如：IL-4、IL-5、IL-13）。IL-12（P>0.05）无明显变化。TGF-β1（P<0.05)在治疗后1个月时有显著增高。FoxP3（P>0.05)的百分比无明显变化。CD28（P<0.05)的表达明显升高，但是ICOS（P>0.05)的水平没有明显变化。3HE染色，治疗前镜下观察可见毛囊及皮脂腺周围大量淋巴细胞浸润，偶见少量嗜酸性粒细胞。治疗后3个月时镜下观察头皮HE染色切片，可见毛囊及皮脂腺周围淋巴细胞浸润基本消失。4直接免疫荧光测定表明TGF-β1在治疗后表达增强，其在毛囊周围形成“TGF-β1环”。为了说明TGF-β1产生的源头，我们做了双染，通过使用单核细胞/巨噬细胞（CD14和CD11b）、朗格汉斯细胞（CD83和DEC205）和Treg T细胞（FoxP3）的表面标记，仅有一部分CD14+的单核细胞/CD11b+的巨噬细胞和FoxP3+的Treg细胞移行进入到了真皮内产生TGF-β1，我们发现治疗后在毛囊的角质形成细胞内有TGF-β1的强表达。CD83和DEC205在治疗前后均无表达。结论：脐血多能干细胞对于重症斑秃的治疗是可行的，并且安全有效。它调节了斑秃患者的自身免疫，恢复了Th1/Th2型细胞因子的平衡。改善了毛发的生长情况，并且产生了持久的作用。

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摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
英文缩写  9-10
引言  10-11
材料与方法  11-16
结果  16-18
附图  18-27
附表  27-29
讨论  29-32
结论  32
参考文献  32-36
综述  36-46
  参考文献  42-46
致谢  46-47
个人简历  47

脐血多能干细胞对重症斑秃的临床治疗及相关免疫机制研究

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