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UVB辐射对人成纤维细胞5-mC和5-hmC水平的影响

作　者: 孔伟
导　师: 黄进华
学　校: 中南大学
专　业: 临床医学
关键词: 中波紫外线 DNA甲基化 5-甲基胞嘧啶 5-羟甲基胞嘧啶人成纤维细胞
分类号: R758.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：1.探讨UVB辐射对体外培养人成纤维细胞增殖能力的影响。2.探讨UVB辐射对体外培养人成纤维细胞5-甲基胞嘧啶(5-mC)和5-羟甲基胞嘧啶(5-hmC)水平的影响。方法：1.常规体外培养原代人成纤维细胞,将细胞分为两组：空白对照组和UVB处理组(累积剂量50mJ/cm2UVB辐射)；2.四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测成纤维细胞增殖情况3.HE染色观察细胞形态学变化；4.免疫组织化学ABC法检测成纤维细胞5-mC和5-hmC表达水平；5.免疫荧光法检测成纤维细胞5-mC和5-hmC表达水平；结果：1.HE染色观察细胞形态变化：空白对照组的成纤维细胞排列规则,成漩涡状或栅栏状,细胞形态呈长梭形,胞质丰满,胞膜完整,可见核分裂象UVB处理组的成纤维细胞与空白对照组相比,细胞数目明显减少且排列不规则,细胞变得宽大扁平,多数呈现多角形,胞质疏松透明,边界变得不清楚,胞核内颗粒物增多,核分裂象少见。2.MTT检测结果为UVB处理组细胞的吸光度值随时间(第24、48、72、96、120小时5个时间点)升高并不显著,而空白对照组细胞的吸光度值则明显升高；且空白对照组在72h、96h、120h各时间点吸光度值均明显高于UVB照射组(P<0.05)。3.免疫组织化学ABC法检测空白对照组5-hmC表达明显低于处理组,而5-mC表达明显高于处理组(P<0.05)。4.免疫荧光法检测结果同免疫组织化学ABC法：空白对照组5-hmC表达水平明显低于处理组,而5-mC表达水平明显高于处理组(P<0.05)结论：1.亚毒性剂量(50mJ/cm2)的UVB辐射能明显抑制体外培养人成纤维细胞细胞的增殖能力。2.UVB辐射能下调体外培养人成纤维细胞内5-mC的表达水平,同时上调5-hmC的表达水平。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
符号说明  9-10
1 绪论  10-12
2 材料和方法  12-19
  2.1 主要仪器及试剂  12-14
    2.1.1 主要仪器  12
    2.1.2 主要试剂及耗材  12-13
    2.1.3 主要相关试剂配制  13-14
  2.2 实验方法及步骤  14-18
    2.2.1 细胞培养  14-16
    2.2.2 MTT法检测UVB对成纤维细胞增殖活力的影响  16
    2.2.3 HE染色法观察细胞形态变化  16-17
    2.2.4 免疫组化(ABC法)检测细胞5-mC和5-hmC的表达  17
    2.2.5 免疫荧光法检测细胞5-mC和5-hmC的表达  17-18
  2.3 统计学方法  18-19
3 实验结果  19-29
  3.1 原代培养人成纤维细胞光学显微镜下细胞形态  19
  3.2 HE染色法观察空白对照组和UVB照射组细胞形态变化  19-21
  3.3 MTT法检测空白对照组和UVB照射组细胞增殖活力  21
  3.4 免疫组化法ABC法检测两组细胞内5-hmC和5-mC的表达水平  21-24
    3.4.1 免疫组化ABC法测得5-hmC的表达水平  22
    3.4.2 免疫组化ABC法测得5-mC的表达水平  22-24
  3.5 免疫荧光法检测两组细胞内5-mC和5-hmC的表达水平  24-27
    3.5.1 免疫荧光法测得5-mC的表达水平  25
    3.5.2 免疫荧光法测得5-hmC的表达水平  25-27
  3.6 附实验室同期相关研究结果  27-29
4 讨论  29-34
  4.1 UVB对人成纤维细胞增殖活性的影响  29-30
  4.2 UVB辐射对细胞甲基化水平的影响  30-31
  4.3 甲基化胞嘧啶与5-羟甲基化胞嘧啶  31-32
  4.4 紫外线辐射致DNA甲基化异常的可能机制  32-34
5 结论  34-35
参考文献  35-39
综述  39-50
  参考文献  45-50
攻读学位期间主要的研究成果  50-51
致谢  51

UVB辐射对人成纤维细胞5-mC和5-hmC水平的影响

内容摘要

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