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PAI-1-RNAi对SD大鼠瘢痕组织及转化生长因子-β1的影响

作　者: 郭铮
导　师: 李艳佳
学　校: 河北医科大学
专　业: 皮肤病与性病学
关键词: 瘢痕疙瘩纤溶酶原激活抑制剂-1 转化生长因子-β1 小干扰RNA 免疫组化
分类号: R751
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
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内容摘要

目的：瘢痕疙瘩（keloid）是由于皮肤受到损伤后在伤口愈合过程中成纤维细胞的过度增殖和细胞外基质（extracellular matrixc， ECM）在伤口区域过度沉积而形成的疾病。以往研究认为PAI-1的高表达，或许直接参与瘢痕疙瘩的形成，同时在瘢痕疙瘩的发生过程中转化生长因子-β1也发挥着重要的作用，应用小干扰RNA（siRNA）技术，探讨PAI-1-RNAi对SD大鼠瘢痕组织及转化生长因子的影响，为瘢痕疙瘩的发病机制及治疗开辟新的思路。方法：1SD大鼠背部瘢痕模型的建立与分组：(1)选取雄性SD大鼠，10%醛麻醉，去除部皮毛、消毒，于脊柱两侧做半径1.5cm的圆形创面，全层皮肤缺损，每日观察伤口愈合情况。(2)7天后，创面用微量注射器隔日注射，每次注射高浓度组0.05ml(实验试剂浓度为20nmol/ml)，低浓度组0.05ml(实验试剂浓度为10nmol/ml)，瘢痕组与正常组注射等同剂量生理盐水，直至创面愈合。2采用形态学变化及平均愈合时间，测量瘢痕厚度，HE染色，Masson染色，Van-Gieson染色比较皮肤瘢痕组织学改变。3通过免疫组化染色（SP法）检测TGF-β1的表达水平结果：1平均愈合时间结果：高浓度组、低浓度组、瘢痕组、正常组平均愈合时间为(21.15±1.46)d、(24.92±1.55)d、(27.38±1.19)d、(18.61±1.32)d，统计学结果表明正常组愈合时间最快（P＜0.01），高浓度组愈合时间明显短于低浓度组和瘢痕组（P＜0.01），低浓度组愈合时间明显短于瘢痕组（P＜0.01），瘢痕组愈合时间最长（P＜0.01）。（见Table1）2瘢痕测量结果：高浓度组、低浓度组、瘢痕组、正常组四组结果分别为(1.70±0.07)mm、(1.98±0.07)mm、(2.66±0.06)mm、(1.25±0.05)mm，统计学结果表明瘢痕组明显大于高浓度组和低浓度组（P＜0.01），低浓度组明显大于高浓度组（P＜0.01），正常组最小（P＜0.01）。（见Table2）3HE染色瘢痕组真皮层明显变厚,为周边正常真皮层厚度的3～4倍,可见胶原纤维粗大，排列紊乱，胶原纤维束形成大量结节样结构，其间有大量炎性细胞浸润及毛细血管扩张。（见Fig.2.4）高浓度组真皮层轻度增厚,可见少量胶原纤维粗大，排列较整齐，偶见结节样结构，其间可见炎性细胞浸润及毛细血管扩张。（见Fig.2.2）低浓度组真皮层增厚,可见胶原纤维粗大，排列较紊乱，可见少量胶原纤维束形成的结节样结构，其间有炎性细胞浸润及毛细血管扩张。（见Fig.2.3）正常组中，真皮层略显增厚，胶原纤维界限清晰，胶原排列致密，结构平整，弹性纤维减少，未见炎性细胞浸润及毛细血管扩张。（见Fig.2.1）4Masson染色Masson胶原纤维染色结果：胶原纤维呈蓝色。瘢痕组真皮层可见大量排列紊乱，粗大的深蓝色胶原纤维，可见大量成纤维细胞，呈梭型。（见Fig.3.4）高浓度组真皮层蓝色胶原纤维染色相对淡浅，排列稀疏整齐，成纤维细胞数量减少。（见Fig.3.2）低浓度组真皮层蓝色胶原纤维染色较深，排列致密，较紊乱，可见成纤维细胞。（见Fig.3.3）正常组真皮层胶原纤维排列致密，整齐，可见少量成纤维细胞。（见Fig.3.1）5Van-Gieson染色瘢痕组真皮层可见少量的褐色弹性纤维与粗大的胶原纤维混杂，排列紊乱。（见Fig.4.4）高浓度组可见少量的弹性纤维排列整齐，颜色较深。（见Fig.4.2）低浓度组可见少量的弹性纤维排列疏松，颜色为淡褐色，和排列紊乱的胶原纤维混杂。（见Fig.4.3）正常组褐色着染的弹性纤维在真皮层中排列致密，颜色深。（见Fig.4.1）6免疫组化结果：TGF-β1在正常皮肤、瘢痕疙瘩的表皮及真皮中均会有阳性表达，为黄或棕黄色颗粒，主要定位于上皮基底层细胞和真皮层的成纤维细胞(Fig.5)。采用二级计分法判定结果，四组中TGF-β1的表达水平比较（Table3），TGF-β1在瘢痕组中阳性率为82．61％，高浓度组中为50.00％，低浓度组中阳性率为66.69%，正常组中为28.00％。TGF-β1四组中表达的阳性率有明显差别(P=0.001<0．05)，在瘢痕组中TGF-β1阳性率最高，随着试剂浓度的增高，TGF-β1阳性率降低。结论：本研究成功建立了大鼠背部瘢痕疙瘩模型，PAI-1-RNAi干预瘢痕疙瘩后改善其瘢痕厚度，愈合时间，病理形态学也有所改善。同时TGF-β1在瘢痕组表达的阳性率明显高于正常组，且随着试剂浓度的增高，TGF-β1在低浓度组、高浓度组表达的阳性率逐渐下降，说明TGF-β1是参与瘢痕疙瘩形成机制中的重要细胞因子，PAI-1有可能正调节TGF-β1的表达。PAI-1有可能通过正调节TGF-β1抑制瘢痕组织的形成。

全文目录

摘要  4-7
ABSTRACT  7-11
英文缩写  11-12
前言  12-13
材料与方法  13-18
结果  18-20
附图  20-28
附表  28-30
讨论  30-34
结论  34
参考文献  34-37
综述  37-48
  参考文献  44-48
致谢  48-49
个人简历  49

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