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IL-10基因转染在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

作　者: 黄竹
导　师: 李兵
学　校: 辽宁医学院
专　业: 眼科学
关键词: IL-10 基因转染腺病毒角膜移植免疫耐受
分类号: R779.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的应用大鼠穿透性角膜移植模型，将腺病毒介导的IL-10转染角膜作为供体，研究其是否可以诱导角膜移植的免疫耐受。方法1、取Wistar大鼠角膜植片，对照组:含10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培养基；GFP组：含有滴度为108的GFP-Adenovirus重组腺病毒的10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培养基； IL-10组：含有滴度为108的IL-10-GFP-Adenovirus重组腺病毒的10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培养基。4℃，3h后三组培养基均换成含10%小牛血清（FCS）的RPMI-1640培养基继续培养，分别在3、24、48、72小时用倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜观察角膜植片的荧光表达情况。Westen Blot方法检测转染后角膜植片中IL-10的蛋白表达情况。2、动物实验分为三组：对照组、GFP组、IL-10组，以Wistar大鼠为供体，SD大鼠为受体，分别取供体角膜植片培养在每组对应的培养基中，在4℃条件下培养3h后建立大鼠穿透性角膜移植模型。术后每日在裂隙灯下观察角膜植片的状态，并记录角膜植片存活时间。术后第12天通过RT-PCR方法、ELISA方法检测各组细胞因子的变化，应用组织病理学检测各组术眼角膜的病理变化。结果1、在四个时间点观察，3h时各组未见荧光表达，24h时GFP组和IL-10组角膜内皮层有少量荧光表达，到48h时表达达到高峰，至72h时荧光表达逐渐减退。Westen Blot方法检测到在IL-10组转染的角膜植片中IL-10蛋白的高表达。2、IL-10组的角膜植片存活时间（16.00±1.67d）较对照组（10.17±1.94d）、GFP组（12.00±0.89d）显著延长（P＜0.01），GFP组与对照组比较差异无显著性（P＞0.05）。RT-PCR方法检测IL-10组角膜中IL-2、INF-γ与其他各组比较明显降低， TGF-β、IL-10、IL-4与其他各组比较明显升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；ELISA方法检测房水中IL-4与其他各组比较明显升高， TNF-α与其他各组比较明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01），组织病理学检查示IL-10组角膜植片轻度水肿、增厚，且炎性细胞浸润较少。结论1.、在体外，GFP-Adenovirus和IL-10-GFP-Adenovirus能顺利转染进角膜组织中。2、用IL-10基因转染过的角膜植片能诱导角膜移植免疫耐受，延长角膜植片的存活时间。Th1/Th2的偏离及Th3因子增高，是其诱导移植耐受的机制之一。

全文目录

中文论著摘要  4-6
英文论著摘要  6-8
英文缩略语表  8-9
前言  9-10
实验材料与方法  10-20
实验结果  20-25
讨论  25-30
结论  30-31
本研究创新性的自我评价  31-32
参考文献  32-36
附图  36-42
综述  42-52
  参考文献  47-52
在学期间科研成绩  52-53
致谢  53-54
个人简介  54-55

IL-10基因转染在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

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