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硒和ONOO~-对晶状体上皮细胞中Src蛋白硝化和磷酸化的影响

作　者: 李琳
导　师: 黄开勋
学　校: 华中科技大学
专　业: 无机化学
关键词: 硒白内障硝化磷酸化过氧亚硝酸根 Src家族激酶
分类号: R776.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 6次
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内容摘要

白内障是导致患者失明的重要原因之一，已经成为流行病学研究的热点。白内障的致病因素很多，病理复杂，但不论是老年性还是糖尿病性白内障的形成都与氧化应激导致晶状体上皮细胞（LECs）的损伤相关。过氧亚硝酸根（ONOO^-）是一种强的氧化剂和硝化剂，能够硝化蛋白质的酪氨酸残基，激活Src激酶，活化相关信号转导途径，影响LEC的分化。本文以人晶状体上皮细胞（hLECs）为对象，主要采用免疫印迹（Westernblotting）的方法，研究了ONOO^-对hLECs蛋白质酪氨酸硝化、磷酸化的影响，以及硒对ONOO^-的影响的抑制作用。主要研究结果如下：（1）免疫印迹的结果表明，外源性硝化剂ONOO^-在100⁵00μM范围内，对hLECs总蛋白质酪氨酸的硝化呈剂量依赖性增强，对蛋白质酪氨酸的磷酸化具有明显的抑制作用，说明蛋白质酪氨酸的硝化对磷酸化具有抑制作用。在细胞培养基中补充适量浓度的Na₂SeO₃，能增强细胞的抗氧化损伤，抑制hLECs内总蛋白酪氨酸的硝化水平，25nM的Na₂SeO₃能对蛋白质酪氨酸因硝化抑制的磷酸化有明显的削弱作用。（2）ONOO^-在100⁵00μM范围内，高浓度的ONOO^-，能明显降低hLECs中Src蛋白表达水平，上调其酪氨酸418（Tyr418）磷酸化水平，这种现象可能与细胞因ONOO^-对Src的损伤而出现的代偿性作用有关。在先补充一定量的Na₂SeO₃（25⁵0nM）后，能明显减轻ONOO^-对hLECs中Src表达的抑制，甚至能上调Src蛋白表达、抑制其Y418磷酸化的水平；但当补充Na₂SeO₃的浓度达到100nM时，虽然Src蛋白的Y418磷酸化水平升高，但hLECs中Src蛋白的表达与单纯ONOO^-组比较没有明显的差异，这可能与高浓度的Na₂SeO₃具有促进氧化应激有关。以上初步的结果说明ONOO^-导致hLECs中Src蛋白酪氨酸的硝化抑制了其磷酸化，而适量的硒对这一抑制有一定的缓解作用，但这个结论还有待进一步实验的证实。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
1 绪论  7-19
  1.1 引言  7-8
  1.2 蛋白质硝化与磷酸化  8-13
  1.3 氧化应激与白内障  13-15
  1.4 Src 激酶在晶状体细胞分化中的作用  15-18
  1.5 研究目的和主要工作  18-19
2 材料与方法  19-28
  2.1 主要试剂及溶液配制  19-22
  2.2 主要仪器  22-23
  2.3 实验方法  23-28
3 结果与讨论  28-46
  3.1 硒和 ONOO~-对 hLECs 存活率的影响  28-32
  3.2 硒和 ONOO~-对 hLECs 中总蛋白硝化与磷酸化的影响  32-38
  3.3 硒和 ONOO~-对 hLECs 中 Src 蛋白表达和 Tyr418 磷酸化的影响..  38-46
4 全文总结  46-47
致谢  47-48
参考文献  48-53

硒和ONOO~-对晶状体上皮细胞中Src蛋白硝化和磷酸化的影响

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