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大鼠视网膜干细胞的培养及增殖和分化能力的研究
作 者: 张瀚
导 师: 赵家良
学 校: 北京协和医学院
专 业: 临床医学
关键词: 视网膜干细胞 细胞培养 增殖 分化
分类号: R774.1
类 型: 博士论文
年 份: 2009年
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内容摘要
[背景]目前眼科医生对一些直接损害视网膜细胞的疾病,如青光眼、视网膜变性疾病等仍无有效的治疗办法,而视网膜干细胞的研究为治疗这些疾病带来了希望。视网膜干细胞的体外培养、增殖和分化的研究已经取得了一定的进展,但也存在着培养体系不统u一、增殖和分化机制不明确等问题。对视网膜干细胞的进一步深入研究可以为将来的临床应用创造条件。[目的]探索应用改良的方法培养大鼠视网膜干细胞,并比较不同年龄段大鼠视网膜干细胞增殖和分化能力的差异。[方法]使用含血清培养基直接培养的方法对取材于15日龄胚鼠、出生24h内大鼠和出生5d大鼠视网膜神经层的视网膜混合细胞进行培养和传代。使用免疫荧光染色和RT-PCR的方法研究视网膜干细胞的增殖和分化情况,并比较不同年龄段大鼠之间的差异。[结果]改良的培养方法成功地培养了大鼠视网膜干细胞并进行了传代。免疫荧光染色显示随着传代的进行,视网膜干细胞增殖并占据优势,同时逐渐向神经节细胞方向分化。RT-PCR显示随着传代的进行,15日龄胚鼠视网膜干细胞的Musashi和Nestin mRNA表达水平基本不变,Thy-1mRNA表达水平逐渐上升;出生24h内大鼠视网膜干细胞的Musashi mRNA表达水平基本不变,Nestin mRNA逐渐下降,Thy-1mRNA表达水平逐渐上升;出生5d大鼠视网膜干细胞的Musashi和Nestin mRNA表达水平逐渐下降, Thy-1mRNA表达水平逐渐上升。[结论]改良的培养方法对于培养和传代干细胞是稳定而可靠的,并可使视网膜干细胞向神经节细胞的方向分化。15日龄胚鼠的视网膜干细胞的增殖能力和保持未分化特性的能力最强;出生5d大鼠的视网膜干细胞向神经节细胞分化的能力最强。
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全文目录
缩略词表 4-6 摘要 6-7 Abstract 7-9 前言 9-11 材料和方法 11-20 一 实验对象 11 二 主要试剂 11-12 三 抗体 12 四 主要耗材 12 五 主要仪器 12-13 六 主要工作液的制备 13-14 七 实验方法 14-20 结果 20-34 一 视网膜细胞的混合培养和传代 20-24 二 Nestin抗体和Thy-1抗体的免疫荧光染色 24-30 三 RT-PCR检测三种基因mRNA的表达水平 30-34 讨论 34-41 一 本研究的设计思路 34 二 改良的细胞培养方法 34-36 三 实验结果的分析 36-39 四 本研究的局限性 39-40 五 展望 40-41 结论 41-42 参考文献 42-45 综述 45-58 参考文献 53-58 致谢 58
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中图分类: > 医药、卫生 > 眼科学 > 视网膜及视神经疾病 > 视网膜疾病
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