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大鼠视网膜干细胞的培养及增殖和分化能力的研究

作 者: 张瀚
导 师: 赵家良
学 校: 北京协和医学院
专 业: 临床医学
关键词: 视网膜干细胞 细胞培养 增殖 分化
分类号: R774.1
类 型: 博士论文
年 份: 2009年
下 载: 11次
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内容摘要


[背景]目前眼科医生对一些直接损害视网膜细胞的疾病,如青光眼、视网膜变性疾病等仍无有效的治疗办法,而视网膜干细胞的研究为治疗这些疾病带来了希望。视网膜干细胞的体外培养、增殖分化的研究已经取得了一定的进展,但也存在着培养体系不统u一、增殖和分化机制不明确等问题。对视网膜干细胞的进一步深入研究可以为将来的临床应用创造条件。[目的]探索应用改良的方法培养大鼠视网膜干细胞,并比较不同年龄段大鼠视网膜干细胞增殖和分化能力的差异。[方法]使用含血清培养基直接培养的方法对取材于15日龄胚鼠、出生24h内大鼠和出生5d大鼠视网膜神经层的视网膜混合细胞进行培养和传代。使用免疫荧光染色和RT-PCR的方法研究视网膜干细胞的增殖和分化情况,并比较不同年龄段大鼠之间的差异。[结果]改良的培养方法成功地培养了大鼠视网膜干细胞并进行了传代。免疫荧光染色显示随着传代的进行,视网膜干细胞增殖并占据优势,同时逐渐向神经节细胞方向分化。RT-PCR显示随着传代的进行,15日龄胚鼠视网膜干细胞的Musashi和Nestin mRNA表达水平基本不变,Thy-1mRNA表达水平逐渐上升;出生24h内大鼠视网膜干细胞的Musashi mRNA表达水平基本不变,Nestin mRNA逐渐下降,Thy-1mRNA表达水平逐渐上升;出生5d大鼠视网膜干细胞的Musashi和Nestin mRNA表达水平逐渐下降, Thy-1mRNA表达水平逐渐上升。[结论]改良的培养方法对于培养和传代干细胞是稳定而可靠的,并可使视网膜干细胞向神经节细胞的方向分化。15日龄胚鼠的视网膜干细胞的增殖能力和保持未分化特性的能力最强;出生5d大鼠的视网膜干细胞向神经节细胞分化的能力最强。

全文目录


缩略词表  4-6
摘要  6-7
Abstract  7-9
前言  9-11
材料和方法  11-20
  一 实验对象  11
  二 主要试剂  11-12
  三 抗体  12
  四 主要耗材  12
  五 主要仪器  12-13
  六 主要工作液的制备  13-14
  七 实验方法  14-20
结果  20-34
  一 视网膜细胞的混合培养和传代  20-24
  二 Nestin抗体和Thy-1抗体的免疫荧光染色  24-30
  三 RT-PCR检测三种基因mRNA的表达水平  30-34
讨论  34-41
  一 本研究的设计思路  34
  二 改良的细胞培养方法  34-36
  三 实验结果的分析  36-39
  四 本研究的局限性  39-40
  五 展望  40-41
结论  41-42
参考文献  42-45
综述  45-58
  参考文献  53-58
致谢  58

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中图分类: > 医药、卫生 > 眼科学 > 视网膜及视神经疾病 > 视网膜疾病
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