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miR-143在甲状腺相关性眼病中的作用机制及糖皮质激素临床冲击治疗研究

作　者: 闾倩
导　师: 石勇铨
学　校: 第二军医大学
专　业: 内科学
关键词: miR-143 甲状腺相关性眼病 TSHR 糖皮质激素
分类号: R771.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：通过研究miR-143对甲状腺相关性眼病(thyroid-associated ophthalmopat hy, TAO)患者眶后成纤维细胞(OFs)促甲状腺激素受体(TSHR)表达的调控及透明质酸(HA)分泌的影响,探讨miRNA-143在TAO发生与发展中的分子机制。且通过临床研究评价大剂量糖皮质激素冲击治疗方法对TAO的疗效及对肾上腺皮质功能的影响。方法：取TAO患者及对照组成纤维细胞原代培养,运用免疫荧光技术进行鉴定。通过Real-time PCR方法检测两组眶后成纤维细胞miRNA-143的表达量,验证芯片结果准确性。人工合成反义寡核苷酸(anti-miR-143)和miR-143模拟体(miR-143m imics),转染至TAO患者成纤维细胞,应用Real-Time PCR和Western blotting方法检测转染细胞中TSHR mRNA及蛋白的表达变化,双荧光素酶报告基因检测miRNA-143的作用靶点。ELISA法测定眶后成纤维细胞转染前后HA分泌量的变化。临床研究将48例活动性中、重度TAO患者采用分层随机方法分为间歇治疗组(24例)和维持治疗组(24例)。两组患者分别于冲击治疗前,冲击治疗结束后第4周及第24周进行疗效与不良反应评定,并检测血清皮质醇(F)昼夜节律、促肾上腺皮质激素(ACTH)及24小时尿皮质醇水平,分析两种治疗方案疗效及对肾上腺皮质功能的影响。结果：1.与对照组眶后成纤维细胞相比,miR-143基因在TAO患者中呈低水平表达,与基因芯片结果一致。2.miRNA-143过表达后成纤维细胞的TSHR mRNA的表达水平下降,对应的TSHR蛋白的表达水平下降；相反,miR-143抑制性表达后TSHR的mRNA及蛋白表达水平升高,P<0.05。双荧光素酶报告基因载体方法证实miR-143直接作用于TSHR mRNA的3’UTR区发挥作用。3.miR-143抑制性表达后对成纤维细胞HA的分泌起到促进作用。4.糖皮质激素间歇治疗组、维持治疗组疗效(有效率分别为83.3%、87.5%,无效或恶化率分别为16.7%、12.5%,F=0.68；复发率分别为20%、19.0%,F=0.94)无显著差异,维持治疗组患者在冲击治疗结束后第4周肾上腺皮质功能受到显著抑制(P<0.05),在冲击治疗结束后第24周均恢复正常。结论：在TAO患者眶后成纤维细胞中miR-143基因呈显著低表达,通过上调TSHR的表达水平,促进成纤维细胞的HA的分泌参与TAO的发生与发展。临床大剂量甲基强的松龙间歇冲击治疗TAO有效,维持治疗患者疗效无显著改善,且肾上腺皮质功能抑制更加明显。

miR-143在甲状腺相关性眼病中的作用机制及糖皮质激素临床冲击治疗研究

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