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NF-κBp65 siRNA对口腔鳞癌Tac8113细胞株增殖、凋亡和耐药的影响

作　者: 王云
导　师: 龚莉
学　校: 泸州医学院
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 口腔鳞癌 NF-κBp65 siRNA 细胞增殖细胞凋亡耐药
分类号: R739.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：应用siRNA干扰口腔鳞癌Tac8113细胞株内NF-KBp65基因的表达,同时联合应用化疗药物5-Fu,观察NF-κBP65siRNA对口腔鳞癌Tac8113细胞株增殖、凋亡和耐药的影响,拟为口腔鳞癌的基因治疗提供新思路。方法：体外培养Tac8113细胞,并分为三组：①空白对照组；②阴性对照组；③实验组。1.构建NF-κBp65siRNA,瞬时转染口腔鳞癌Tac8113细胞,应用荧光显微镜观察Tac8113细胞的转染情况,并计算细胞转染率；2.应用半定量RT-PCR法检测转染后对Tac8113细胞内NF-κBP65mRNA表达水平的影响；3.应用ELISA法检测转染后对Tac8113细胞内NF-κBP65蛋白表达水平的影响；4.应用MTT法检测转染后对Tac8113细胞增殖的影响；5.应用流式细胞仪(AnnexinV-FITC/PI法)检测转染后对Tac8113细胞凋亡的影响；6.转染后将细胞分为未转染组(空白对照组)和转染组,联合应用不同浓度的化疗药物5-Fu (Omg/L、16.35mg/L、32.7mg/L、327mg/L、3270mg/L、6540mg/L),培养72h,观察转染后Tac8113细胞对化疗药物5-Fu敏感性的变化。结果：1.应用荧光标记的NF-κBp65siRNA转染Tac8113细胞,转染后24h,荧光显微镜观察发现多数实验组细胞胞核内有绿色荧光信号存在,细胞转染率约为61.1%；2.半定量RT-PCR检测结果显示,转染后48h,空白对照组、阴性对照组、实验组细胞内NF-κBP65mRNA的相对表达量分别为0.539±0.036、0.514±0.031、0.313±0.031,实验组细胞内NF-κBp65mRNA的相对表达量与空白对照组和阴性对照组相比明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05);3.ELISA检测结果显示,转染后48h,空白对照组、阴性对照组、实验组细胞内NF-KBp65蛋白的相对表达量分别为1.165±0.074、1.182±0.049、1.002±0.055(ng/ml),与空白对照组和阴性对照组相比实验组细胞内NF-κBp65蛋白的相对表达量明显减少,差异具有统计学意义(P<0.05)；4.MTT检测结果显示,在各时间段内实验组细胞生长缓慢,实验组细胞的增殖活性与空白对照组和阴性对照组的比较明显降低,细胞增殖明显受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05),且在转染后第72h抑制作用最大,细胞抑制率达到28.1%；5.流式细胞仪检测结果显示,转染后72h,三组细胞的细胞凋亡率分别为(8.50±0.92)%、(8.39±1.03)%、(24.58±2.31)%,实验组细胞的凋亡率要明显高于两个对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),且实验组细胞的早期凋亡率升高幅度要大于晚期凋亡率；6.转染后联合应用不同浓度的5-Fu, MTT检测结果显示,转染后72h,未转染组和转染组细胞的增殖活性随着浓度的升高都有下降的趋势,但在同一浓度内转染组细胞的增殖活性明显低于未转染组细胞,差异具有统计学意义伊<0.05),即转染后Tca8113细胞对化疗药物5-Fu的敏感性明显升高。结论：1.NF-κcBp65siRNA可有效地转染口腔鳞癌Tac8113细胞。2.转染后NF-KBp65mRNA和蛋白的表达量明显减少,结果提示NF-κBp65siRNA沉默了Tac8113细胞内NF-κBp65基因的表达。3.沉默NF-κBp65基因可抑制Tac8113细胞的生长增殖,并且可诱导Tac8113细胞的凋亡。4.沉默NF-κBp65基因后,Tac8113细胞对化疗药物5-Fu的敏感性得到提高。5.沉默NF-κBp65基因可作为口腔鳞癌基因治疗的潜在靶点。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-9
前言  9-12
材料与方法  12-23
结果  23-27
附图  27-29
讨论  29-35
结论  35-36
参考文献  36-42
英汉缩略词对照表  42-43
致谢  43-44
综述  44-54
  参考文献  50-54

NF-κBp65 siRNA对口腔鳞癌Tac8113细胞株增殖、凋亡和耐药的影响

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