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PCDH8基因对鼻咽癌细胞株CNE-1作用机制的研究

作　者: 石宇良
导　师: 胡国华
学　校: 重庆医科大学
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: PCDH8 鼻咽癌 CNE-1
分类号: R739.63
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的探讨PCDH8基因表达对鼻咽癌细胞体外增殖、周期、侵袭、药物敏感性等生物学行为的影响及其机制研究。方法采用脂质体介导将质粒pcDNA3.1-PCDH8（实验组）与质粒pcDNA3.1（对照组）转染至鼻咽癌细胞株CNE-1，应用RT-PCR、Westernblot技术检测转染后CNE-1细胞中PCDH8mRNA及蛋白的表达情况；通过CCK-8细胞生长曲线试验，流式细胞周期试验，Transwell侵袭试验、CCK-8细胞药物敏感性试验及裸鼠皮下种植瘤模型，进一步对转染PCDH8基因的细胞株CNE-1的增殖能力、生长周期、细胞侵袭能力、对化疗药物的敏感性及其体内成瘤能力进行分析，并与转染对照质粒的细胞株进行对比。通过Real time PCR检测实验组与对照组MMP-9、MMP-2、VEGF基因mRNA水平表达变化，Western blot检测实验组与对照组CDK-4、P21、P27、JNK基因蛋白水平表达变化，了解PCDH8基因在鼻咽癌细胞内的作用机制。结果①RT-PCR、Western blot检测表明转染质粒pcDNA3.1-PCDH8的实验组细胞株中PCDH8mRNA及蛋白成功表达并明显高于转染质粒pcDNA3.1的对照组细胞株（P<0.05）。②CCK-8细胞生长曲线试验表明试验组细胞株的生长速度明显低于对照组（P<0.05）。③流式细胞周期试验检测实验组细胞株G0/G1期较对照组增加，S期细胞较对照组减少（P<0.05）；④Tramswell侵袭试验表明实验组细胞株侵袭能力明显低于对照组（P<0.05）。⑤CCK-8细胞药物敏感性试验表明PCDH8基因表达能显著提高鼻咽癌细胞株CNE-1对顺铂化疗药物的敏感性（P<0.05）；⑥裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤模型中表达PCDH8基因的实验组CNE-1细胞的成瘤能力低于对照组CNE-1细胞（P<0.05）。⑦Realtime PCR试验证明在mRNA水平上MMP-9在实验组的表达量低于对照组（P<0.05），而MMP-2、VEGF在实验组的表达量与对照组无明显差别(P>0.05)；⑧Western bolt试验中CDK-4、P27、JNK基因在实验组中的表达高于实验组的表达（P<0.05）。P21在实验组中的表达高于对照区但差异无统计学意义（P>0.05）。结论脂质体成功介导pcDNA3.1-PCDH8与pcDNA3.1质粒转染入鼻咽癌CNE-1细胞株并建立稳定细胞株。PCDH8基因的表达能降低CNE-1细胞的增殖、侵袭能力，延缓细胞分裂周期，提高对顺铂化疗药物的敏感性，降低鼻咽癌细胞体内成瘤能力。PCDH8基因可能通过MMP-9、CDK-4、P27、JNK基因及相关通路，作用于鼻咽癌细胞，在抑癌方面起到一定作用。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-6
中文摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-12
第一部分 PCDH8 基因转染鼻咽癌细胞株 CNE-1 及其对细胞生物学行为的影响  12-30
  1 实验材料与方法  12-22
  2 结果  22-28
  3 讨论  28-30
第二部分 PCDH8 基因对人鼻咽癌细胞株 CNE-1 相关蛋白的影响  30-41
  1 材料与方法  30-35
  2 结果  35-38
  3 讨论  38-41
全文总结  41-43
参考文献  43-47
附插图  47-51
文献综述  51-58
  参考文献  55-58
致谢  58-59
攻读学位期间发表的学术论文  59-60

PCDH8基因对鼻咽癌细胞株CNE-1作用机制的研究

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