学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
肝细胞癌患者石蜡包埋肝组织HBVcccDNA的原位检测
作 者: 胡双烨
导 师: 钟彦伟
学 校: 桂林医学院
专 业: 病理学与病理生理学
关键词: 乙型肝炎病毒 共价闭合环状DNA 肝细胞癌 原位PCR 滚环扩增
分类号: R735.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 21次
引 用: 0次
阅 读: 论文下载
内容摘要
目的:原发性肝细胞癌(HCC)是一种常见的高度恶性肿瘤,其发病率位居我国癌症发病率的第二位。流行病学证实乙肝病毒(HBV)的感染是HCC发生的独立危险因素。共价闭合环状DNA(cccDNA)是HBV生命周期中重要的复制中间体,是乙型肝炎病毒前基因组RNA(pgRNA)的原始合成模板,已经被公认为HBV持续感染和肝脏进行性病理改变的根本原因。体外试验及动物试验研究均提示HBVcccDNA与肝细胞癌变的发生密切相关。目前,肝组织内HBVcccDNA的定量检测方法随着PCR技术的发展和应用已日趋成熟,而人肝癌组织内HBVcccDNA的定位检测研究,国内外鲜见报道。本研究通过一种新型的原位检测方法,检测HCC患者癌及癌旁组织中HBVcccDNA的表达,探讨其在HCC中的意义,为临床上原发性肝细胞癌的预防和治疗提供新的理论根据。方法:收集20例北京302医院2011年9月-2012年9月期间住院的HCC患者癌及癌旁组织手术切除标本,经10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,5μm连续切片后使用。采用不降解质粒的ATP依赖的DNA (PSAD)酶消除松弛的环状HBVDNA(rcDNA)后,根据我国常见的HBV基因型B、C基因组全序列,设计引物4对,应用原位滚环扩增(RCA)的方法只扩增环状的DNA,再采用针对HBVcccDNA与HBVrcDNA结构上的差异所设计的5端地高辛标记的特异性引物进行直接原位跨缺口PCR,进一步扩增HBVcccDNA。通过免疫组织化学方法进行显色,在显微镜下观察HBVcccDNA在肝组织中表达及分布。以肝癌患者肝组织为例,设置无引物、无地高辛标记引物、无Phi29酶和DNA聚合酶反应体系,以及非乙型肝炎病毒感染肝组织(包括健康成人肝组织5例,转基因小鼠肝组织2例,丙型肝炎患者肝组织3例)作为阴性对照组。结果:20例肝细胞癌患者肝组织标本中有17例(85%)检测到HBVcccDNA阳性信号,为紫红色或紫蓝色呈团块状,定位于细胞核。肝癌患者癌组织及癌旁组织HBVcccDNA阳性率分别为10%(2/20)和85%(17/20),两者差异有显著性(P<0.01)。阴性对照组均未见阳性信号表达。结论:PSAD酶消化加滚环扩增结合原位PCR方法能够定位检测肝癌组织和癌旁组织中HBV cccDNA的表达,该方法具有一定的特异性和敏感性;肝细胞癌患者癌旁组织病毒复制水平高于癌组织。
|
全文目录
中文摘要 4-6 ABSTRACT 6-8 英汉缩略词对照表 8-9 前言 9-12 1 材料与方法 12-19 2 结果 19-26 3 讨论 26-30 4 结论 30-31 参考文献 31-36 综述 36-62 参考文献 53-62 攻读学位期间发表的学术论文目录 62-63 致谢 63-65 桂林医学院硕士研究生学位论文答辩资格审查表 65
|
相似论文
- STAT3、MMP-2在肝细胞癌中的临床意义,R735.7
- 绿茶提取物EGCG抗乙型肝炎病毒的分子机理研究,R285
- 河南省樱桃谷鸭乙型肝炎病毒(DHBV)分子流行病学调查及FNC抗DHBV体内试验研究,S858.32
- 安徽省部分地区乙型肝炎分子流行病学初步研究,R512.62
- 基于化学发光微粒子免疫分析法对乙型肝炎抗HBc和抗HBe的精密测定,R512.6
- 恩替卡韦治疗失代偿期乙型肝炎肝硬化72周临床疗效观察,R512.62
- 乙型肝炎病毒相关性肾炎尿液蛋白质组学的研究分析,R692.3
- 明胶海绵微粒化疗栓塞肝细胞癌术后调节性T细胞变化及其意义,R735.7
- 极低频率电磁场对肝癌细胞凋亡及相关基因表达影响的初步研究,R735.7
- 糖皮质激素对乙型肝炎重症化阻断作用的临床研究,R512.62
- 恩替卡韦耐药慢性乙型肝炎病毒全基因特征、质粒构建及其挽救治疗,R512.62
- 四川省西昌市静脉吸毒人群HIV/HCV/HBV/梅毒新发感染及高危行为变化的研究,R181.3
- 肝动脉化疗栓塞联合动脉内灌注恩度治疗中晚期肝细胞癌对血清VEGF、MMP的影响及其疗效研究,R735.7
- TC21/R-RAS2在肝细胞癌中表达与生物学功能的初步研究,R735.7
- 鲁南地区HBV基因型和HBV核心启动子双点突变与肝硬化、肝癌的关系探讨,R512.62
- 利用外显子捕获测序技术筛选及验证肝癌相关突变基因,R735.7
- 青岛地区乙肝病毒BCP基因突变与乙肝相关性原发性肝癌的相关性研究,R512.62
- 肝细胞癌中TGF-β1和E-cadherin的表达意义及二者相关性,R735.7
- 抑癌基因PLAGL1在人肝细胞癌中的表达及其意义,R735.7
- HMGB1在肝细胞癌组织中的表达及意义,R735.7
- 炎症介质白三烯D4在慢性乙型肝炎和原发性肝癌发生发展中的作用,R512.62
中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com
|