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叶下珠提取物对肝癌细胞的影响

作 者: 洪剑锋
导 师: 饶力群
学 校: 湖南农业大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: 叶下珠 提取物 BEL-7404细胞 凋亡
分类号: R735.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
下 载: 6次
引 用: 0次
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内容摘要


目的:探讨叶下珠提取物在不同剂量下作用于体外培养的人肝癌细胞株BEL-7404的效果,摸索其对肝癌细胞诱导凋亡及杀伤作用的最佳剂量,并进一步从分子水平研究叶下珠抑制肝癌细胞作用可能的机理,为将叶下珠开发为又一种有效的抗癌药物打下基础。方法:采用流式细胞仪TUNEL法检测叶下珠提取物诱导BEL-7404细胞凋亡情况;采用光镜观察体外培养的BEL-7404细胞在叶下珠提取物处理后形态学的变化;通过流式细胞PI法检测叶下珠提取物对BEL-7404细胞的杀伤性;应用流式细胞术检测细胞CasPase-3的活化程度;利用细胞免疫化学法测定叶下珠提取物处理人肝癌BEL-7404细胞后一些与细胞凋亡密切相关蛋白质的表达情况。结果:(1)流式TUNEL法检测300μg/mL、500μg/mL叶下珠提取物作用于BEL-7404,可使细胞凋亡率达到(22.1±9.4)%,(21.6±8.3)%。(2)显微镜观察:浓度≥300μg/mL浓度的叶下珠提取物处理的BEL-7404细胞内细胞液较为浑浊,大部分细胞呈圆形或近圆形,体积较正常细胞减小,多数不能贴壁生长,细胞碎片、悬浮和脱落的细胞大量的出现,并且细胞克隆生长状态散开。(3)在300μg/mL-1000μg/mL浓度范围内,随着浓度升高叶下珠提取物对BEL-7404细胞有杀伤作用逐渐增强。(4)通过检测CasPase-3的活性表明,其随着叶下珠提取物浓度的增加而明显活化。(5)经过叶下珠提取物处理BEL-7404后,免疫细胞化学结果显示,Bcl-2蛋白表达量下降,Bax、Apaf-1蛋白表达量升高。结论:(1)叶下珠提取物对BEL-7404细胞有较为明显的杀伤作用,并且能够诱导其凋亡。(2)叶下珠提取物可激发CasPase-3的活性并促进其自我激活,增强了Bax和Apaf-1这两种促进肝癌细胞凋亡的蛋白的表达,减弱能够抑制肝癌细胞凋亡的Bcl-2蛋白表达。(3)叶下珠有着被进一步开发为抗肝癌药物的潜力。

全文目录


中文摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章 文献综述  9-13
  1. 叶下珠提取物的化学成分  9
  2. 叶下珠的药理作用研究  9-13
    2.1 叶下珠的抗肿瘤作用  9-10
    2.2 叶下珠的抗乙肝病毒作用  10
    2.3 叶下珠的保肝护肝作用  10-11
    2.4 叶下珠的抗疱疹病毒作用  11-12
    2.5 叶下珠对凝血系统的影响  12
    2.7 叶下珠的抗氧化作用  12
    2.8 叶下珠的镇痛作用  12-13
第二章 叶下珠提取物对肝癌细胞的影响  13-30
  1. 前言  13
  2. 材料与方法  13-17
    2.1 供试材料与细胞株  13
    2.2 试剂  13-14
    2.3 仪器设备  14
    2.4 试验方法  14-17
  3. 结果与分析  17-22
    3.1 显微镜下观察BEL-7404细胞株形态学变化  17-19
    3.2 PI法探索叶下珠提取物对BEL-7404细胞毒性的最佳浓度  19-20
    3.3 TUNEL法测定叶下珠提取物诱导BEL-7404细胞的凋亡率  20-21
    3.4 利用免疫细胞化学法检测细胞Apaf-1,Bax, Bcl-2蛋白表达  21
    3.5 流式细胞术分析Caspase-3活性  21-22
  4. 讨论  22-28
    4.1 抗肿瘤中药及其机理  22-23
    4.2 流式细胞术  23
    4.3 叶下珠提取物诱导肿瘤细胞凋亡的测定  23-24
    4.4 PI法测定叶下珠提取物对BEL-7404细胞毒性  24
    4.5 TUNEL法检测叶下珠提取物诱导BEL-7404细胞的凋亡率  24
    4.6 叶下珠提取物诱导BEL-7404细胞凋亡可能机制  24-25
    4.7 免疫细胞化学法检测Bax,Bcl-2,Apaf-1蛋白的表达  25-27
    4.8 流式细胞术分析Caspase-3活性  27-28
  5. 结论  28-30
参考文献  30-34
致谢  34

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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