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YAP的转录调控子GABP与肝癌的相关性研究
作 者: 田静
导 师: 周大旺
学 校: 厦门大学
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: GABP YAP 肝癌
分类号: R735.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2014年
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内容摘要
Hippo信号通路是一条进化上高度保守的信号转导通路,主要参与调控器官大小以及肿瘤的形成。这条通路包含几个肿瘤抑制子和一个潜在的原癌基因。这条蛋白激酶的级联反应负调控着原癌基因YAP和它的同源物TAZ,抑制它们转录调控的活性。上游肿瘤抑制子失去功能的突变及下游YAP的过表达的情况已经在不同的人类癌症中被证实。我们课题组之前发现:YAP基因的表达是被一个Ets转录家族的成员GABP所调控的。GABP是Ets转录家族唯一一个多聚体复合物,它包含GABPα和GABPβ两种不相关的蛋白。GABPα通过它的Ets区域来调节DNA的结合,但是无转录功能。GABPβ包含转录激活区域、核定位序列和四个重复的锚定蛋白来调节它和GABPα异源二聚体的形成。GABP结合在YAP的启动子上激活YAP的转录。在中国,肝癌是一种非常常见的恶性肿瘤。但是它发病的分子机制到目前为止仍然不是很清楚。很多的研究都表明了YAP参与肝癌的产生过程,由于GABP是一个新发现的YAP的转录激活子,我们还不清楚GABP在肝癌的发生发展中的作用,于是我们决定探索GABP和肝癌产生的关系。根据之前的研究,在肝脏中条件性双敲除Mst1/Mst2(DKO)会导致肝细胞的大量增殖并且在两个月内发生肝癌。我们首先用实时定量PCR技术检测了DKO小鼠肝脏中YAP的mRNA水平,发现其有两到三倍的增加。接下来我们想要验证YAP的mRNA的水平增加与GABP调控的关系。我们分别选取了六周大和四个月大的DKO小鼠以及它们各自的野生型对照小鼠,并获取了这些小鼠的肝脏组织细胞全裂解液,进行了蛋白免疫印迹的实验。结果显示:两种年龄的DKO小鼠GABPα蛋白表达水平都有增加,而只有四个月发生肝癌的小鼠GABPβ蛋白水平增加。同时这种YAP水平和GABP水平的上调也用免疫组化的方法得到了验证。为了验证GABP的这种上调是否在人类肝癌中也是同样的表现,我们收集了60对人类肝癌样品组织来进行研究。通过蛋白免疫印迹实验和实时定量PCR的技术都验证了:与正常肝脏组织比起来,癌组织中GABP的表达是上调的,并且免疫组化的实验还证实了GABP在癌细胞核内的聚集和高表达。综上,GABP作为YAP的转录激活子确实参与了肝癌的发生发展,GABP很可能成为一个治疗人类肝癌以及其他癌症的靶点。GABP的表达水平也很可能成为一个肝癌或其他癌症的诊断、治疗和预后的判断新依据。
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全文目录
摘要 10-12 ABSTRACT 12-14 第一章 前言 14-30 1.1 Hippo信号通路的概述 14-15 1.2 Hippo信号通路重要分子的介绍 15-23 1.2.1 MST1/2 15-16 1.2.2 WW45 16-17 1.2.3 Lats1/2 17-18 1.2.4 Mob1 18 1.2.5 GABP 18-19 1.2.6 YAP 19-21 1.2.7 TAZ 21-22 1.2.8 TEAD 22-23 1.3 Hippo的上下游 23-24 1.3.1 Hippo的上游 23 1.3.2 Hippo的下游靶基因 23-24 1.4 中国癌症的现状 24 1.5 Hippo信号通路与各种癌症的相关性 24-29 1.5.1 与卵巢癌 25-26 1.5.2 与胃癌 26-27 1.5.3 与非小细胞肺癌 27-28 1.5.4 与肝癌 28 1.5.5 与结直肠癌 28-29 1.5.6 与乳腺癌 29 1.6 立题背景 29-30 第二章 实验材料与仪器设备 30-44 2.1 实验材料 30-31 2.2 仪器设备 31-33 2.3 实验方法 33-44 2.3.1 临床肝癌样品取样方法 33-35 2.3.2 肝脏组织的全细胞裂解液制备方法 35 2.3.3 Bradford测蛋白浓度方法 35-36 2.3.4 SDS-PAGE蛋白电泳 36-38 2.3.5 免疫组化相关实验 38-41 2.3.6 Trizol法提取RNA 41 2.3.7 浓度的测量以及纯度的鉴定 41-42 2.3.8 RNA的反转录 42 2.3.9 cDNA的质量检测 42-43 2.3.10 qPCR引物 43 2.3.11 LivaK法分析目的基因表达量 43-44 第三章 实验结果 44-57 3.1 MST1/2 DKO小鼠肝脏中YAP和GABP的表达情况 44-47 3.1.1 MST1/2 DKO小鼠肝脏中YAP基因的mRNA的表达显著增加 44-45 3.1.2 MST1/2 DKO小鼠肝脏中YAP和GABP的蛋白表达水平上调 45-46 3.1.3 免疫组化分析表明DKO小鼠肝脏GABP和YAP表达量明显增加且细胞核定位增强 46-47 3.2 人类肝癌临床样本库的建立及分析 47-50 3.3 人肝癌样品中Hippo信号通路重要分子的表达情况研究 50-57 3.3.1 人肝癌中Hippo信号通路调控异常并伴随YAP和GABP表达量增加 50-52 3.3.2 癌组织和非癌组织的YAP,GABPα和GABPβ的比值均大于1 52-53 3.3.3 与非癌变的组织相比,癌变区域的YAP、GABPα和GABPβ均增加且更集中在细胞核 53-55 3.3.4 与非癌变组织相比,癌组织中YAP、GABP的mRNA水平上调 55-57 第四章 讨论与展望 57-59 参考文献 59-66 致谢 66
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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