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原发性腹膜后脂肪肉瘤相关基因的筛选与鉴定

作　者: 李伟民
导　师: 窦科峰
学　校: 第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: 基因芯片差异基因原发性腹膜后脂肪肉瘤脂肪组织
分类号: R735.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

原发性腹膜后脂肪肉瘤（primary retroperitoneal liposarcoma, PRPLS）是最好发腹膜后软组织肉瘤(retroperitoneal soft tissue sarcoma,RPS)。占RPS总发病率的41%，主要发生在肾脏周围，发病年龄多集中在40-60岁之间。腹膜后腔隙较大，患者起病隐匿，缺乏早期特异性症状和体征，多数就诊时肿瘤已生长较大且与周围脏器关系复杂，致使其手术完整切除率较低，加之肿瘤本身局部侵袭力强，导致术后易局部复发。PRPLS临床治疗的最大难题恰恰在于其易复发性，尽管近些年手术完整切除率随着手术技巧及设备的发展得到了提高，但术后较高的复发率仍没有得到控制。加强针对PRPLS的基础研究，了解其生物学特性，是解决此难题的根本途径。基因芯片技术是近十年发展起来的新型基因功能分析技术，可以检测一系列基因在不同组织或细胞中的表达谱情况。基因芯片具有高速度、高通量、集约化和低成本的特点，使其诞生之际就受到科学界的广泛关注。其可对比研究正常组织或细胞与肿瘤组织或细胞之间基因表达谱的特点，更深入了解肿瘤的发生机制，有利于肿瘤的早期诊断、治疗和预后。故通过基因芯片技术检测肿瘤组织与正常组织间基因表达差异，是目前肿瘤基因研究的有效手段和策略。本研究通过筛查PRPLS和正常脂肪组织的具有表达差异的基因，为进一步研究PRPLS的发生、发展提供有价值的线索。目的通过基因芯片技术研究PRPLS和正常脂肪组织间的基因表达差异，可以寻找到与原发性腹膜后脂肪肉瘤发生、发展相关的候选基因并为其防治研究提供线索。方法1.选择2例我院手术切除的PRPLS标本并以患者自身的正常脂肪组织作为对照，应用基因芯片技术检测全基因组序列，分析其基因表达差异；2.再选取5例我院手术切除的PRPLS标本和患者自身腹腔内的正常脂肪组织，分别挑选7种显著上调的基因和3种显著下调的基因，利用PCR技术对芯片结果进行验证；3.最后选取我院5年间手术切除的35例PRPLS患者标本蜡块，并切除35例我科日常手术患者腹腔内正常脂肪组织。利用免疫组化技术来验证显著上调基因中的BIRC7和PTK7的基因以及显著下调的TUSC5基因在PRPLS和正常脂肪组织的表达情况。结果1.基因芯片结果显示：两组间的差异表达基因3828个，其中表达上调有1837个基因，表达下调有1991个基因。其中涉及细胞增殖、黏附、凋亡以及信号通路等多种生物学过程。2.实时定量RT-PCR方法验证了10例样本中mRNA的表达。选择GAPDH作为内参基因，结果显示目的基因在所有样本中的差异表达与芯片结果的差异比值都比较接近，说明了基因芯片结果可靠。3.免疫组化结果显示：BIRC7蛋白在PRPLS中的阳性表达率为71.43%(25/35)，在正常脂肪组织组织中的阳性表达率为5.7%(2/35)。差异有统计学意义(X2=31.895，P<0.001)；PTK7蛋白在PRPLS中的阳性表达率为77.14%(27/35)，在正常脂肪组织组织中的阳性表达率为2.9%(1/35)。差异有统计学意义(X2=40.238，P<0.001)；TUSC5蛋白在正常脂肪组织中阳性表达率为65.71%(23/35)，在PRPLS中阳性表达率为14.29%(5/35)。差异有统计学意义(X2=19.286，P<0.001)；BIRC7和PTK7蛋白在PRPLS组织中的表达显著高于正常脂肪组织，而TUSC5蛋白在正常脂肪组织中的表达显著高于PRPLS组织。结论我们基因表达谱芯片筛选出与PRPLS发生和进展密切相关的基因。证实了PRPLS的发生、发展是多个癌症相关基因的异常表达进而引起多种生物学功能异常改变的复杂过程，对这些表达异常基因进行综合分析，可以从分子水平阐明PRPLS发生、发展的某些机制，为其基础研究及临床早期诊断、预防和治疗提供潜在的分子标记和靶基因。

原发性腹膜后脂肪肉瘤相关基因的筛选与鉴定

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